影响ELISA中非▽特异性显色的原因很多,如试剂盒特异性、检验标本中含酶】标记物的干扰物,操作过程中的问题。本文就这一原因作一简要分析,以便可以通过以上措施①把非特异显色降至最低限度,从而㊣提高检测的特异性,并得到更准确、可靠的实验结果。
1、ELISA试剂盒特异性因素
1、1 固相载体的选择。ELISA中常用的固相载体有微量滴定◣板、小珠和小试管三种,以微量滴定板最为常见。
1、2包被物的纯度。在酶联免疫测定尤其是间接ELISA中,试剂的特异性取决于使用抗原的纯度。
1、3包被抗体的效价『。具有高亲和力】和高特异性的包被抗体,是决定试剂特异性的重要方面。
1、4 封闭。是ELISA中重要的一步,目的是封闭固相载体表面尚未被所占据的空隙,减少后续步骤中非特异性蛋白的干『扰。
2、ELISA试剂盒中检验标本中含▓有酶标记物的干扰物
2、1内源性干扰物:类风湿因子(RF)、黄疸等,类风湿因子是可作用于多种动物以及人IgGFc段的自身抗体,多数为IgM类,能充当抗原成分与固▼相及酶标抗体反应,从而呈现非特异性显色█。
2、2 外源性干扰物,常常因样品采集、贮存、处理不当造成如样品溶血,被细〗菌污染,标本凝集不全等。溶血标本,红细胞㊣溶解破裂,释放出血红素形成,而血红素中的铁卟啉是过氧化物酶的类似物,以HRP为标记的ELISA测定中,溶血标本可能会增加非特异性显色。