菌种的分离包括:
(1)孢子分离
(2)组织分离
(3)基质菌丝分离
(1)孢子分离
(一) 采集孢子:选子实体,消毒
放在15——20℃的室内,大约在24——48小时后可见褐色的蘑菇孢子印,收集到无菌空试管中进行真空干燥之后放入冰箱可长时间保存以备用
(1) 孢子分离
(一) 多孢♀子分离
a. 斜面划线法
在PDA试管斜面培养基上自上而下轻划放在24℃恒温培养箱中,15——20天后●挑选菌落转接于新试管培养基上培养。
b. 涂布分离法
取一小块具有孢子的◇滤纸条,放入装有无菌水的三角瓶中,充分摇匀,用已经灭菌的试管吸取悬浮液滴,1——2滴到PDA试管或培养皿的培养基上24℃恒ω温培养菌丝萌发后,挑选发育匀称,生长旺盛的菌落,移接到另一试管中作为母种。
(二) 单孢子分离法
a. 稀释分离法》♂:用PDA培养基在24——25℃培养,5天后菌丝开始萌发,挑选Ψ 出菌落均匀旺盛的移接到新的PDA培养基上进行培养,可以用打孔器进行打孔移接。
b. 毛细管分离法:孢子控制※在200——300个/ml,在PDA培养基中进行培养控制温度在24℃,待菌丝萌发后用接种铲移接到新的PDA培养上24℃恒温培养即可得到单孢子纯种。
c. 器械分离法:控制↑孢子在1000个/ml,用PDA培养基,控温在24℃恒温培养,10天后用肉眼可见菌丝萌发的小菌落,应把该菌落及时用打菌∞器移接到新的PDA培养基上,从而得到纯种单孢子。