操作步骤

1、准备：从冰箱取出试剂盒，室温复温平衡30分钟。

2、配液：用蒸馏水将20倍浓缩洗涤液稀释成原倍的洗涤液。

3、加标准品和待测样本：取足够数量的酶标ω　包被板，固定于框架上，分别设置标准品孔、待测样本孔和空白对照孔，记录各孔位置，在标准品孔中加入标准品50μL；待测样本孔中先加入待测样本10μL，再加样本稀释液40μL（即样本稀♀释5倍）；空白对照孔不加。

4、温育：37℃水浴锅或恒温箱温育30min。

5、洗板：弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重◥复洗板4次（也可用洗板机按说明书〓操作洗板）。

6、加酶标工作液：每孔加入♀酶标工作液50μL，空白对照孔不加。

7、温育：37℃水浴锅或恒温箱温育30min。

8、洗板：弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板4次（也可用洗板机按说明书操作洗板）。

9、显色：每孔先加入显色剂A 液50μL，再加入显色剂B液 50μL，平板混匀器混匀30s（或用手轻轻震荡混匀30s），37℃避光显色15min。

10、终止：取出酶标板㊣，每孔加终█止液50μL，终止反应（颜色由蓝色立转黄色）。

11、测定：以空白孔调零》，在终止后15分钟内，用450nm波长测量各孔的吸光值（OD值）。

12、计算：根据标准品的浓度及对应的OD值，计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样本的OD值，在回归方程上计算出对应的样品浓度，也可以使用各种应用№软件来计算。最终浓度为实际测定浓度乘以稀释倍数。

 

鱼类白介素1βelisa试剂盒灵敏度100%；特异度96%；假阳性率3%；假阴性率0；准确度99%；约登指数0.96；可以检测90个标本的，剩下6个可用来做标准曲线，或者做94个标本，2个标准对照。

 

需要而未提供的试剂和器材

1. 标准规格酶标仪

2. 高速离心∏机

3. 电热恒温培养箱

4. 干净的试管和Eppendof管

5. 系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，最好用多通道移液器

6. 蒸馏水，容量瓶等

 

鱼类白介素1βelisa试剂盒实验原理：

用纯化的抗体包被微孔板，制成固体载体，往包被抗该指标抗体的微孔中依次加入标●本或标准品、生物素化的抗该标抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄★色，颜色的深浅和样品中的该指标呈正相关。用酶标仪在450nm波长下『测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

 

计算
  以标准物的浓度为纵坐标（对数坐标），OD值为横坐标（对数坐标），在对数坐标纸上绘出标准曲线。推荐使▲用专业制作曲线软件进行分析，如curve expert 1.3，根据样品〓的OD值由标准曲线查出相应的浓度，再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

 

鱼类白介素1βelisa试剂盒  注意事项

1．试剂盒从冷藏环境中取出应在〓室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不▲影响结果。

3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

4．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测☉物质含量过高（样本OD值大于标准品↑孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。

5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物◥请避光保存。

7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9．本试剂不同批号组分不得混用。

 

 补充说明 
1. 在储存及孵育过程中避免将试剂暴露在强光中。所有试剂瓶盖须盖紧以防止蒸发和污染，试剂避免受到微生物ξ　的污染，因为蛋白水解酶的干扰将导致出现错误的结果。 
2. 小心吸取试剂并严格遵守给卐定的孵育时间和温度。请注意在吸取标本 / 标准品，酶结合物或底物时，第一个孔与最后一个孔加样之间的时间间隔如果太大，将会导致不◆同的 “预孵育”时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。而且，洗涤不充分将影响试验结果。 
3. 试剂盒保存：部分试剂保存于-20℃，部分试剂保存于2-8℃，具体以标签◢上的标示为准。 
4. 浓洗涤液︼会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。 
5. 刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样⌒物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。 
6. 中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。 
7. 所有的样品都应管理好，按照规定的程序处理样品和检测装置。 
8. 有效期：6个月