我公司所代理的ELISA试剂盒是美国RD的，还有国产的，质量肯定是可以保证绝对优质的，我们还提供全程指导，就是说您在实验中的任何问题都可以咨询，上海恒远都会为您安排解决。我们今天来看的实验就是有关于ELISA方法，下面来看看让我们使用ELISA法来检验噬菌体抗体与目的抗原的亲和力。
在实验中我们需要用到的材料与试剂列表：
操作实验的十四个步骤：
1、将抗原用PBS或0.5mol/L Na2CO3(pH9.6)稀释至10μg/ml;
2、对于要检测的每个克隆,至少包被2个孔,每孔用200μl稀释抗原。同时包被阴性对照抗原。此外,包被阳性对照抗原,阳性对∏照抗原用anti-M13抗体;
3、室温包被1～2h,最好于4℃过夜包被,甩＠掉孔中液体,倒置于纸巾上空干。
4、每孔中用至少200μl 1%BSA封闭,37℃1h。去掉液体后空干。
5、将重组噬菌体事先用等体积的封闭液于室温下封闭15min～30min,以封闭各种蛋白质之间的非特异性结合位点。
6、在每个包被抗原孔中,加入稀释的◣重组噬菌体悬液200μl,37℃ 1～2h。在包被了阳性对照抗原的孔中,加入200μl阳性对照噬菌体。
7、去掉孔中液体,倒置于纸巾上。将板浸入PBS/0.5% Tween20(PBST)中,振荡赶走气泡,将板取出。重复洗涤5遍。
8、将板倒置于纸巾上↓,去掉所有液体。
9、将HRP酶标的Anti-M13抗体用封闭缓冲液稀释至合适浓度。
10、在每孔中加入200μl HRP/Anti-M13稀释液。
11、37℃温育1h。按前述方法洗涤6次。
12、每21ml 1×ABTS底物溶液中加入36μl 30% H2O2。在每孔中加入200μl。
13、置室温20～60min,直至出现适中的颜色反应。加入2mol/L H2SO4终止反应。
14、于415nm波长下用◤酶标仪读出光吸收值。良好的数据中№,噬菌体抗体与筛选抗原的吸收值应当比阴性对照抗原的吸收值高2～3倍。
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