实验试剂1. LB培养基
2. PEG/NaCl
3. TBS
4. 0.1M NaHCO3(pH8.6)
5. HRP底物缓冲液
6. ABTS贮存液：在100ml 50mM的柠▂檬酸钠溶液(pH4.0)中溶解22mgABTS，过滤除菌贮存在4℃。
实验设备1. 酶标板，酶标仪
2. 湿盒
3. 吸水纸
实验步骤1. 噬斑扩增上清部分用于DNA序列测定，其余保存于4℃。
2. 将ER2537接种至20ml LB培养基中，37℃孵育至轻微混浊，或将过夜培养的ER2537按1：100稀释至20ml。
3. 加入5ml噬菌体上＠清，37℃剧烈通】气培养4.5h。
4. 将培养物转入离心管，10，000转离心10min。取上清转入新的离心管，再次离心。
5. 吸取上层80%的上清转入新离心管中，加入1/6体积的PEG/NaCl，4℃沉淀1h或过夜。
6. 4℃，10，000转离心PEG沉淀物15min。倾去上清，再次短暂离心，吸去残々留上清。
7. 用1ml TBS悬浮○沉淀物，并转至微量离心管中，4℃离心5min以沉淀残留细胞。
8. 将上清转至新离心管中，再次用1/6体积的PEG/NaCl沉淀噬菌体。冰上孵育15~60min，4℃离心10min。倾去上清，再次短暂离心，吸去残留上清。
9. 用50ml TBS悬浮沉淀物。测定滴度，贮存于4℃。
10. 取100~200ml溶于0.1M NaHCO3(pH8.6)的100mg/ml靶蛋〗白包被酶标板的加样孔，在密封的湿盒内4℃孵育过夜。每一个克隆包被一列。
11. 倾去靶溶液，并将板子反扣在吸水纸上尽量吸干。在每一个孔中加满封闭缓冲液。另外，每□个克隆都需要封闭一列未包被的加样孔，以检测其与BSA包被板子的结合。封闭另一个酶标板用来稀释噬菌体，这样可以保证稀释过程中噬菌体不被靶蛋白吸收。4℃封闭1~2h。
12. 倾去封闭液，用1×TBS/Tween洗涤板子6次，每次都将酶标板反扣在吸水纸上尽量吸干。Tween的浓度应该与筛选洗涤步骤的浓度相同。
13. 用TBS/Tween 4倍比稀释噬■菌体，200ml/孔，第一孔为1012颗粒，第十二孔为2×105颗粒。
14. 用多道加样枪，将每一列倍比稀释的噬菌体转至靶蛋白包被的酶标板内。室温振荡孵育1~2h。
15. 用1×TBS/Tween洗板6次。
16. 用封闭ㄨ缓冲液稀释HRP标记的抗M13抗体，稀释度为1：5000，每孔加入200ml，室温振荡孵育1h。
17. 用1×TBS/Tween洗板6次。
18. 制备HRP底物缓冲液。ABTS贮存液：在100ml 50mM的柠檬酸钠▃溶液(pH 4.0)中溶解22mgABTS，过滤除菌贮存在4℃。使用液要新鲜配制，在21ml ABTS贮存液中加入36ml 30%H2O2，用于一个酶标板。
19. 每孔加入200ml底物缓冲液，室温孵育10~60min。
20. 酶标♂仪检测405~415nm处的OD值。
