1. 固相载体的选择：许多物质△可作为固相载体，如「聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素¤等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前⌒常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体，在使用前均可进行筛选：用等量抗原包被，在同一实验条件下进行反应，观察其显色反应是否均▆一性，据此判明其吸附性能是否良好。
2. 包被抗体或抗原的选择：将抗体或抗原吸附在固相载体表面时，要求纯度要好,吸附时一般ω要求PH在9.0～9.6之间。吸附温度，时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃ 18～24小时。蛋白质包被的最适浓度需进行滴定：即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被」后，在其它试验条々件相同时，观察阳性标本的OD值。选择OD值最大而蛋白量最少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为々1～10μg/ml。
3. 酶标记∮抗体工作浓度的选择：首先用直接ELISA法进行初步效价的】滴定。然后再固定其它条件或采取“方阵法”，在正式实验☉系统里准确地滴定其工作浓度。
4. 酶的底物及供氢体的选择：对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应，而本身无色。有些供氢体有潜在的致癌作用，应注意防护◥。有条件者应使用不致癌、灵敏度ㄨ高的供氢体，如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后，应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作︼用时间，以10-30分钟为宜。底物使用←液必须新鲜配制，尤其是H2O2在临用前加入▓。
