人环磷酸腺苷(cAMP)酶联免疫分析(ELISA)
试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用。
检测范围： 96T
0.5nmol/L - 16nmol/L
使用目的：
本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中环磷酸腺苷(cAMP)含量。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人环磷酸腺苷(cAMP)水平。用纯化的人环磷酸腺苷(cAMP)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次▼加入环磷酸腺苷(cAMP)，再与HRP标记的环々磷酸腺苷(cAMP)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物Ψ TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化〓成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和ㄨ样品中的环磷酸腺苷(cAMP)呈正相关。用酶标仪在450nm波︽长下测定吸光度(OD值)，通过标准曲线计算样品中人环磷酸腺苷(cAMP)浓度。
试剂盒组成
1 30倍浓缩洗涤液 20ml×1瓶 7 终止液 6ml×1瓶
2 酶标试剂 6ml×1瓶 8 标准品(32nmol/L) 0.5ml×1瓶
3 酶标包被板 12孔×8条 9 标准品稀】释液 1.5ml×1瓶
4 样品稀释∏液 6ml×1瓶 10 说明书 1份
5 显色剂A液 6ml×1瓶 11 封板膜 2张
6 显色剂B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1个
标本要求
1.标本采集后尽早进行提取，提◥取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避㊣ 免反复冻融
2.不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的ぷ(HRP)活性。
操作步骤
1. 标准品的◣稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
16nmol/L 5号标准品 150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液♂
8nmol/L 4号标准品 150μl的5号标╲准品加入〓150μl标准品稀释液
4nmol/L 3号标准品 150μl的4号标准品∩加入150μl标准品稀释液
2nmol/L 2号标准品 150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液
1nmol/L 1号标准品 150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液
人环磷酸腺苷(cAMP)酶联免疫分析(ELISA)
试剂盒使用说明书
2. 加样：分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、标准孔、待测■样品孔卐。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品▽孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触◇及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置︻37℃温育30分钟。
4. 配液：将30倍浓缩洗涤液↑用蒸馏水30倍稀释后备用⌒
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除□ 外。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入卐显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀△，37℃避光显色15分钟.
10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应(此时蓝色立转黄▽色)。
11. 测定：以空白空调零，450nm波长依Ψ 序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内●进行。
操作程序总结：
计算
以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线▲查出相应的浓度;再乘以稀释倍⊙数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线々的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际∞浓度。
注意事项
1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟◥后方可使用，酶标包被板开封后如未①用完，板条应装入密封袋中保存。
2.浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3.各步加样均应使用加▓样器，并经常校对♀其准确性，以避免试验误差。一次◥加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4. 请每次测定的同时做标准曲线，最好做○复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一≡孔的OD值)，请先用样品稀释↓液稀释一定倍数(n倍)后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。
5. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6.底物请避光保存。
7.严格按照说明∮书的操作进行，试验结果判定♀必须以酶标仪读数为准.
8.所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9.本试剂不同批号组分不》得混用。
10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
保存条件及有效期
1.试剂盒保¤存：;2-8℃。
2.有效期：6个月
