本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定牛血清，血浆及相关
液体样本中口蹄疫O型抗体(FMD-O-Ab)含量。
实验原理：
本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中牛口蹄疫 O 型抗体(FMD-O-Ab)水平。用纯化
的抗原包被微孔№板，制成固相抗原，往包被单抗的微孔中依次加入口蹄疫 O 型抗体
(FMD-O-Ab)，再与 HRP 标记的抗原结合，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，经过彻底洗
涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶︼的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化☆成最终
的黄色。颜色的深浅和样品中的口蹄疫O 型抗体(FMD-O-Ab)呈正相关。用酶标仪在450nm
波长⌒下测定吸光度(OD 值)，通过标准曲线计算样品中牛口蹄疫 O 型抗体(FMD-O-Ab)
浓度。
试∏剂盒组成：
| 试剂盒组成 | 48孔配置 | 96孔配置 | 保存 |
| 说明书 | 1份 | 1份 |
|
| 封板膜 | 2片（48） | 2片（96） |
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| 密封袋 | 1个 | 1个 |
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| 酶标◣包被板 | 1×48 | 1×96 | 2-8℃保存 |
| 标准品：108U/L | 0.5ml×1瓶 | 0.5ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 标准品√稀释液 | 1.5ml×1瓶 | 1.5ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 酶标试剂 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 样品⌒稀释液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 显色剂A液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 显色剂B液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 终止液 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 浓◆缩洗涤液 | （20ml×20倍）×1瓶 | （20ml×30倍）×1瓶 | 2-8℃保存 |
样本处理及√要求：
1. 血清：室温血液♀自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上
清，保存过程中如出现沉淀，应再次∏离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择 EDTA 或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合 10-20 分钟后，离心
20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集▃上清，保存过程中如有沉淀↓形成，应该再次
离心。
3. 尿液：用无菌↘管收集■，离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔¤细收集上清，保存过程
中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/
分)。仔细收集上清。检测细胞∞内的成份时，用 PBS(PH7.2-7.4)稀∮释细胞悬液，细胞
浓度达到100万/ml左右。通过反▲复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分
钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保★存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻≡保存备
用。标本融化后仍然保持 2-8℃的温度。加入一定量的 PBS(PH7.4)，用手工或匀浆器
将↓标本匀浆充分。离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。分装后一▂份待
检测，其余冷冻】备用。
6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验Ψ。若不能马←上
进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.
7. 不能检测含NaN3的样品，因 NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤：
1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上ξ 设标准品孔 10 孔，在第一、第二孔⊙中分别加标
准品 100μl，然后在ξ 第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀;然后从第一孔【、第二
孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，
混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔
中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀;混匀后从第五、第六◆孔中各
取 50μl 分别加到∩第七、第八孔中，再在第七、第八孔中〒分别加标准品稀释液 50μl，混
匀后从第七、第八孔中分别取 50μl 加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准
品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl，
浓度◣分别为60 ng/L，40ng/L ，20ng/L，10 ng/L，5ng/L)。
2. 加样：分别设空白＠ 孔(空白对︼照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、待测样
品孔。在酶标包被☆板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl(样
品最终稀释度为 5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触◣及孔壁，轻轻晃动混
匀。
3. 温育：用封ω板膜封板后置37℃温育30 分钟。
4. 配液：将 30(48T的 20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏◆水30(48T的 20倍)倍稀释后备∩用。
5. 洗涤：小心揭掉♀封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此
重复 5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7. 温育：操作同 3。
8. 洗涤：操作同 5。
9. 显色：每孔先加入显色剂 A50μl，再加入显色∞剂 B50μl，轻轻震荡↘混匀，37℃避光显色
15分钟.
10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止
液后 15分钟以内进行。
注意事项：
1.试剂盒〇从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未
用完，板条应装入密封袋中保存。
2.浓洗涤液可能会∞有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3.各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样↙时间最好
控制在5 分钟内，如标▃本数量多，推荐→使用排枪加样。
4.请每次测定的同时做标准≡曲线，最好做】复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值
大于标准品孔第一孔的OD值)，请先用样品稀释液稀释一∏定倍数(n 倍)后再测定，计
算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。
5.封板膜只限一次性▲使用，以避免交叉污染。
6.底物Ψ请避光保存。
7.严格按照说明书的操作々进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8.所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9.本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
计算：
以标准物的浓度为横↘坐标，OD值为纵坐标，
在坐标纸上绘出标ξ 准曲线，根据样品↙的OD
值由标准曲线查出相应的浓度;再乘█以稀释
倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标
准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值
代入方程式，计算出『样品浓度，再乘以稀释
倍数，即为样品的实际「浓度。
试剂盒◇性能：
1.样品线性回归与预期浓度¤相关系数R值为0.990以上。
2.批内与批见应分别小于9%和 11%
检测范围：
3ng/L -70 ng/L
保存条件及有效期：
1.试剂盒保存：;2-8℃。
2.有效期：6个月
