人白细胞介素-17A(IL-17A)酶联免疫分析(ELISA)
试剂盒使用说明书
本试剂仅供研究使用目的：本试△剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中白细胞介素-17A(IL-17A)含量。
实验原理：
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人白细胞介素-17A(IL-17A)水平。用纯化的人白细胞〖介素-17A(IL-17A)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入白细胞介素-17A(IL-17A)，再与HRP标记的白细胞介素-17A(IL-17A)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化╳成蓝色，并在酸的作用下转化成最∩终的黄色。颜色的深浅和样品中的白细胞介素-17A(IL-17A)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，通过∏标准曲线计算样品中人白细胞介素-17A(IL-17A)浓度。
试剂盒组成：
试剂盒组成 48孔配置96孔配√置保存
说明书1份1份
封板膜2片(48)2片(96)
密封袋1个1个
酶标◣包被板1×481×962-8℃保存
标准品：13.5ng/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存
标准品稀释液1.5ml×1瓶1.5ml×1瓶2-8℃保存
酶标试剂3 ml×1瓶6 ml×1瓶2-8℃保存
样品稀释液3 ml×1瓶6 ml×1瓶2-8℃保存
显色剂A液3 ml×1瓶6 ml×1瓶2-8℃保存
显色剂B液3 ml×1瓶6 ml×1瓶2-8℃保存
终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存
浓缩洗涤液(20ml×20倍)×1瓶(20ml×30倍)×1瓶2-8℃保存
样本处☆理及要求：
1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔∮细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离※心。
2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA、者柠★檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集△上清，保存过程①中如有沉淀形成，应该再次离心。
3.尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清，保存过程中如有沉≡淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行■。
4.细胞培养▃上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检♀测细胞内的成份时，用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5.组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4)，用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份↙待检测，其余冷冻备用。
操作步骤
1. 标准品的稀释←与加样：在酶标包被板上设【标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀;然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标ξ 准品稀释液50μl，混匀;然后在第三」孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀;混匀后从卐第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释＠液50μl，混匀后从第︼七◤、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从◇第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后■各孔加样量都为50μl，浓度分别为9 ng/L，6 ng/L，3 ng/L，1.5 ng/L，0.75 ng/L)。
2. 加样：分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样ω品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液：将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液◣用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后①备用。
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试∩剂50μl，空白孔除□ 外。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻↑震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11. 测定：以空白空↘调零，450nm波长依序测量各◆孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
注意事项：
1. 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2. 浓洗涤〇液可能会有结晶析出，稀释时↑可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3. 各步加▲样均应使用加样器，并经常校对¤其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪∏加样。
4. 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本→中待测物质含量过高(样本OD值大『于标准品孔第一孔的OD值)，请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。
5. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6. 底物请避光保存。
7. 严格按照说明书的操▲作进行，试验结果判定必须以酶标仪∑ 读数为准.
8. 所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9. 本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有々异，以英Ψ文说明书为准。
计算：
以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，
在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD
值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释
倍数;或用标准物的浓ξ 度与OD值计算出▼标
准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值
代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释
倍数，即为样品的实际浓度。
试剂盒『性能：
1.样品线性回归〖与预期浓度相关系数R值为0.95以上。
2.批内与批见应分别小于9%和11%
检测范围：
0.5 ng/L -15 ng/L
保存条件及有效期：
1.试剂盒◇保存：;2-8℃。
2.有效期：6个月
上海裕平生物←科技有限公司主要经营各种品牌档次的ELISA试剂盒，品质保证，售后服务完善。并提供免费代检测。服务于高校及免疫学科研单位。技术人员更好的为您服务。
