大鼠去甲肾上腺素(NA)ELISA检测试剂盒
使用说明书
检测原理
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被大鼠去甲肾上」腺素(NA)捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的大∑ 鼠去甲肾上腺素(NA)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值)，计算样品浓度。
样品收集、处理及保存方法
1. 血清：使用〖不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠◣檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。
3. 细胞上清¤液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适♂量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不∴及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样▅品均匀地充分解冻。
自备物品
1. 酶标仪(450nm)
2. 高¤精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒温箱
操作注意事项
1. 试剂盒保■存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封(低温干燥)保存。
3. 标准品稀释液即可视为阴性对照或者空白;预处理后①的样本无需稀释，直接取10μL加样即可。
4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
5. 所有液体组分使用前充分摇匀。
试剂⌒ 盒组成
名称96孔配置48孔配置备注
微孔酶标板12孔×8条12孔×4条无
标准品(240pg/mL)0.6mL 0.6mL 按说明书进◥行稀释№
标准品稀释液6mL3mL无
样本稀释液6mL3mL无
检测抗体-HRP10mL5mL无
20×洗涤♂缓冲液25mL15mL按说明书进行稀释
底物A6mL3mL无
底物B6mL3mL无
终止液6mL3mL无
封板膜2张2张无
说明书1份1份无
自封袋1个1个无
注：标准品用标准品稀释液依次稀释为：240、120、60、30、15、7.5pg/mL
试剂的准备
20×洗涤缓▼冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。
洗板方法
1. 手工洗板：甩尽孔内液体※，每孔加满洗涤液，静置1min后甩尽孔内液体，在吸水纸上々拍干，如此洗板5次。
2. 自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。
操作步骤
1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封︾袋密封放回4℃。
2. 设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
3. 待测样本孔先加待测样】本10μL，再加样本稀释液40μL;
4. 随后标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复◎洗板5次(也可用洗板机洗板)。
6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7. 每孔◤加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。
结果判断
绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准■品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。
试剂盒∩性能
1. 准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.9900。
2. 灵敏度：最低□检测浓度小于1.0pg/mL。
3. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
4. 重复性：板内、板间变异系数均小于15%。
5. 贮藏：2-8℃，避光防潮保存。
6. 有效期：6个月
免责声明
1. 试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或人体实验，否则所产生的一切后果，由实验者承①担，本公★司概不负责。
2. 严格按照说明书操作，实验者违反说明书操□ 作，后果由实验者承担。
