1 标本的采取和保存
可用作 ELISA测定的标本十分广泛,体液(如血清),分泌物(唾液)和排泄物(如尿液,粪便)等。均可作标本以测定其中某】种抗体或抗原 成份.有些标本可直接进行测定(如血清,尿液),有些则需经预处理(如』粪便和某些分泌物).大部分ELISA检测均以血清为标本 .血浆○中除尚含有纤维蛋白原和抗凝剂外,其他成份均同等于血清.制备血浆标本需借助于抗凝剂,而血清标本只要待血清自然凝固,血块收缩后即可╳取得.除特殊情况外,在医学检验中均以血清作︾为检测标本.在ELISA中血浆和血清可同等应用.血清标本可按常规方法采集,应注意避免溶血,红细胞溶解时∩会释放出具有过氧化物酶活性的物质,以HRP为标记的ELISA测定中,溶血标本可能会增加非特异性显色.血清标本宜在新∏鲜时检测.如有细菌污染,菌体中可能含有¤内源性HRP,也会产生假阳性反应.如在冰箱中保存过久,其中的可发生聚合,在间接法ELISA中★可使本底加深.一般说来,在5天内测定的血清标本可放置于4℃,超过一周测◤定的需低温冰存.冻结血清融解后,蛋白质局部浓缩,分布不均,应充分混匀宜轻缓,避免气泡,可上下颠倒混和,不要在混匀器上强烈振荡.混浊或有沉淀的血清标本应先离心△或过滤,澄〓清后再检测.反复冻融会使抗体效价跌落,所以测抗体的ㄨ血清标本如需保存作多次检测,宜少量分装冰存.保存血清自采集时就应注意无菌操作,也可加入适当防腐剂.
2 试剂的准≡备
按试剂盒说明书的要求准备实验中需用的试剂№. ELISA中用的蒸馏水或去离子水,包括用于洗涤的,应为新鲜的和高质量的.自配的缓冲△液应用pH计测量较正.从冰箱中取⌒ 出的试 验用试剂应待温度与室←温平衡后使用.试剂盒中本次试验不需用的部分应及时放回冰箱保存→.
3 加样
在 ELISA中一般有3次加样步聚,即加标本,加酶结合物,加底物.加样时应将所加物加在LEISA板孔●的底部,避免加▽在孔壁上部 ,并注意不↑可溅出,不可产生气泡.
