【摘要】目的测定决明子中5种蒽醌类成分的含量。方法采用高效液相色谱法。色谱柱:Shim-packCLC-ODSC18柱;流动相:甲醇-0.1%磷酸水溶液梯度洗脱;流速:1ml/min;λ:440nm。结果该方法准确可靠,重现性好。结论该方法可以测定决明子中5种蒽醌类成分的含量。
【关键词】高效液相色谱法决明子蒽醌
Abstract:ObjectiveTodeterminethecontentofanthraquinonesinSemenCassiae.MethodsHPLCmethodwasdeveloped.TheseparationwasperformedonanODScolumnwiththemobilephaseofCH3OH-0.1%phosphoricacid.Theflowratewas1ml/minandthedetectionwavelengthwas440nm.ResultsThismethodwasconvenientandreliable.ConclusionThismethodcanbeusedtodeterminethecontentofanthraquinonesinSemenCassiae.
Keywords:HPLC;SemenCassiae;Anthraquinones
决明子为豆科植物决明CassiaobtusifoliaL.或小决明CassiatoraL.的干燥成熟种子。性味甘、苦、咸、微寒,归肝、大肠经。具〖有清肝明目、润肠通便之功效,为临床常用ξ 中药[1]。其主要化学成分为蒽醌类化合物。本实验采用HPLC法同时测定了决明子中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的含量,为决明子中有效物质研究奠定了基础。
1仪器♀与材料
LC-l0ATvp高◣效液相色谱仪(日本岛津公司),AEG-45SM电子天平(十万分之一),大黄素(批号0756200009),大黄酚(批号110796200513),大黄素甲醚(批号07589803)(均购自中国药品生物制品检定所),决明子(重庆合川GAP种植基地,由重庆市中药研究院生药室提供并鉴定),水为重蒸水,甲醇为色谱纯,其他试剂︼均为分析纯。
2方法与结果
2.1对照品溶液的制备分别精密称取芦荟大黄素0.53mg,大黄酸0.58mg,大黄素0.55mg,大黄酚0.53mg,大黄素甲醚0.58mg,加甲醇超声溶解,分别定容至5ml,作为对照品溶液》。
精密吸取上述5种对照品溶液各2.0ml,置于10ml容量瓶中,加甲醇溶解定容至刻度,即得混合对照品溶液,其浓度分别为芦荟大黄素0.0212mg/ml,大黄酸0.0232mg/ml,大黄素0.022mg/ml,大黄酚0.0212mg/ml,大黄素甲醚0.0232mg/ml。
2.2供试品溶液的制备取决明子药材粉末(过4号筛)约1g,精密称定,置索氏提取器中,加80%乙醇100ml回流提取至▃无色,合并提取液,定容至100ml,精密吸取25ml提取液,经减压回收后,残渣加浓度为1mol/L盐酸溶液40ml回流水解3h,然后用120ml氯仿分4次回流萃取,30ml/次,合并氯仿萃取液并加适量蒸馏水洗至中性,回收氯仿。残渣甲醇仿溶解并转移至10ml量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,即得[2,3]。
2.3色谱条件色谱柱为Shim-packCLC-ODSC18(6.0mm×150mm,5um);流动相为甲醇-0.1%磷酸水溶液梯度洗脱;流速1ml/min;柱温25℃;检测波长440nm.
2.4标准曲线』的绘制分别精密吸取混合对照品溶液8,10,12,14,16μl进样,测定基线构成之面积称峰面积。A=×σ×h=2.507σh=1.064Wh/2h>峰面积,绘制标准曲线,计算混合对照品中各对照品的回归方程及线性范围,结果芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的回归方程分别为:Y=814521X-20442,Y=1110506X-7296,Y=1431202X+4274,Y=1739861X-24381,Y=707106X-26453,其线性范围分别为:0.170~0.339,0.186~0.371,0.176~0.352,0.170~0.339,0.186~0.371μg。
2.5精密度实『验精密吸取混合对照品溶液10μl,进样,测定各峰峰面积,连续测定5次,求得各峰面积值的相对标准偏差(RSD)分别为:芦荟大黄素0.7%,大黄酸1.8%,大黄素0.6%,大黄酚1.1%,大黄素甲醚1.4%。结果表明仪器精密度良好。
2.6稳定性实〓验
2.6.1对照品溶液稳定性◎实验精密吸取混合对照品溶液10μl,进样,分别于0,2,4,8,12,24h后重复进样,计算各成分峰面积值的相对标准偏差(RSD)分别为:芦荟大黄素0.9%,大黄酸0.8%,大黄素0.7%,大黄酚1.2%,大黄素甲醚1.3%。结果表明混合对照品溶液在24h内基本上▲是稳定的。
2.6.2供试品溶液稳定性实〓验精密吸取供试品溶液10μl,进样,分别于0,2,4,8,12,24h后重复上述操作,计算各成分峰面积值的相对标准偏差(RSD)分别为:芦荟大黄素0.6%,大黄酸0.7%,大黄素1.3%,大黄酚0.6%,大黄素甲醚1.7%。结果表明供试品溶液在24h内基本上是稳定的。
2.7重现性实验精密称取决明子药材5份,照“2.2”项下供试品溶液的◣制备方法制备供试液,精密吸取供试品溶液10μl,进样,测定各成分峰面积值,计算各成分平均含量及RSD值分别为:芦荟大黄素为0.0084%,RSD为0.8%;大黄酸为0.0079%,RSD为1.1%;大黄素为0.0313%,RSD为1.2%;大黄酚为0.1732%,RSD为0.7%;大黄素甲醚为0.0883%,RSD为1.3%。结果表明,该方法↑具有较好的重现性。
2.8加样回收率实验精密称取决明子药材6份,每份约0.5g,精密称定,分别精密加入大黄酚对照品(50μg/ml)15ml。照“2.2”项下供试品溶液的制备方法制备供试液,精密吸取供试品溶液10μl,进样,测定大黄酚的峰面积。结果见表1。
表1大黄酚回收率测定结果(略)
表1表明,大黄酚的平均回收率为100.94%,RSD值为2.12%。表明该测定方法是合理可行的。
2.9样品的含量测定取不同批次决明子药材粉末(过4号筛)各约1g,精密称定。照“2.2”项下供试品溶液的制备方法制备供试液,精密吸取各供试品溶液10μl,按“2.3”项下色谱条件进样,混合对照品及样品色谱图见图1~2。测定对照成分峰面积,计算含量,即得。测定结果见卐表2。
图1决明子混合对照品色谱图(略)
图2决明子药材色谱图(略)
表2样品含量测定结果(略)
3结论
结果测得,决明子药材中含芦荟大黄素◆平均为0.0081%,大黄酸平均为0.0079%,大黄素平均为0.0306%,大黄酚平均为0.1760%,大黄素甲醚平均为0.0883%。
本文采用高效液相色谱法同↙时测定决明子药材中5种蒽醌类成分的含量,方法简便,分离度好,结果可靠,可用于控制决明子药材¤的质量。
【参考文献】
[1]国家药典委员会.中国药典,Ⅰ部[S].北京:化学工业出版社,2005:98.
[2]杨黎燕.杨秉勤,郎惠云.决明@子蒽醌提取方法的研究[J].西部粮油科技,2003,28(2):59.
[3]蒋午峻,王巧,袁志芳,等.高效液相色谱法同时测定决明子中大黄素、大黄酚和大黄素甲醚[J].河北医科大学学报,2006,27(4):271.