人多能干细胞分化培养基
产品基本信息
产品名称 | Applied Cell?人多能干细胞（ES/iPS）分化培养基 |
货 号 | AC-1001002 |
规 格 | 500mL |
保存条件 | 基础♂培养基2-8℃，添加剂-20～-80℃； 混匀后2-8℃，2周内使用完毕。 |
使用范围 | 人多能干细胞诱导分化，拟胚体形成 |
保质期 | 12个月 |
产品简介
人多能干细胞分化培养基是埃泽思●生物科技有限公司（Applied Cell?）研发的一款适用于人多能干细胞诱导分化的培养＠基。该培养基可用于EB（拟胚体）的形成。拟胚体是人多能干细胞在悬浮培养条件下形成的球状结构，可用于细胞多能性检测，形成拟胚ξ 体可验证细＠ 胞分化潜能。
产品特性
l 诱导人多能干细胞（ES/iPS）形成拟胚体
产品内容
试剂 | 规格 | 数量 | 运输 |
hPSC Differentiation Basal Medium 人多能干细胞分化-基础培养基 | 500mL | 1 瓶 | 冰袋 |
hPSC Differentiation Supplement 人多能干细胞分化-添加剂 | 10mL | 1 瓶 | 干冰 |
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操作方法
实验准备
人多能干细胞分化培养基配制：
1.1 在2-8℃解冻人多能干细胞分化添加剂，轻晃摇匀；
1.2 随后将添加剂加入到人类多能干细胞分化基础培养基中（每10mL添加剂与500mL分化基础培养基彻底混合）混匀即为人多能干细胞分化培养基（AC-1001002）。人多能干细胞分化培养基可在2-8℃稳定储存2-3周。
注意：
1. 人多能干细胞分化添加剂只能在2-8℃解冻，可按实际用量对▲添加剂进行分装，分装后立即使用或储存于-20℃至-80℃保存。
2. 人多能干细胞分化培养基使用前建议在室温平衡10-20min，不建议在37℃加热。
实验操作(以6孔板为例)
2.1 在显微镜下观察人多能干细胞，确认细胞汇合度达到70–80%，准备传代。
2.2 清洗：拿出培养板,吸掉原有培养基，沿培▓养皿边缘缓慢加入37℃预热PBS缓冲液，轻轻晃动冲洗，然后吸去PBS缓冲液；
2.3 消化：在培养板中加入1.5mL人多能干细胞无酶消化液（AC-）使↘之覆盖皿
底，并置于37℃，5%CO2培养箱中孵育2~5 min；
2.4 吹打：吸掉人』多能干细胞消化液（AC-）后，立刻加入室温平衡好的人
多能干细胞分化培养基，用移液枪扇形吹打培养皿底，吹打次数保持在
3~5次，使皿底贴附的干细胞集落脱落，轻柔缓慢◢吹吸混匀，制成干细胞悬液；
注意：吹吸皿底细胞的力度要轻柔，吹打脱落和吹吸混匀的次数在3~5次为宜，尽量避免形成单细胞。如有少量细胞无法从皿底脱落，属于正常现象。如有大量细胞无法从皿底脱落∩，需∞延长消化时间。
3.5制备拟胚体
3.5.1悬滴培养法制备拟胚体
A. 稀释：将细胞悬液稀释，细胞密度约★为1-2×105cells/mL；
B. 制备悬滴：将稀释好的细胞悬液以30-50uL/滴(3000-7000 cells/滴),均匀接种在培养皿皿盖内面，翻转培养皿盖将◆其扣回加有PBS的培养皿上（加入PBS防止悬滴蒸发），放入37℃，5%CO2箱中培养；
C. 3-4天后，非贴壁型培养皿中预先加入人多能干细胞分化培养基，将培养皿盖上的悬滴转移至培养皿中（6cm培养皿加入3-4mL培养基)中，可观察√到明显的拟胚体结构，轻轻晃动培养皿使拟胚体均匀分布在培养㊣ 皿中继续培养。
3.5.2悬浮培养法制备拟胚体
A. 稀释：将细胞悬液稀释，细胞密度约为∏2-5×105cells/mL；
B. 接种：将稀释好的细胞悬液接种至非贴壁型培养皿内。
3.6换液
A. 换液频率：使用悬滴法制々备拟胚体,将悬滴接入非贴壁型培养皿继续培养后，每2-3天换一次液；使用悬浮培养法制备拟胚体，大约在第3天形成明显的拟胚体结构，可进行初☉次换液，后续每2-3天换一次液;
B. 换液方法：将需换液的拟胚体悬液转移至15mL/50mL离心管中，静置约3min,待拟◥胚体沉降至管底，吸掉上清，加入室温平衡好的人多能干细胞分化培养基，用巴士滴管轻轻转移至非贴壁型培养皿中，轻轻晃动培养皿使之均匀分布在培养皿中，37℃，5%CO2培养箱中继续培养。
拟胚体形态图
?
质量控制
检验项目 Test Catagories | 参考数据 Reference Data | 结果 The results |
外观 Physical APPearance | 橙红色液体 Orange-red liquid | 符合规定 Conform to the provisions |
澄清度 Clarity | 澄清 Clear | 符合规定 Conform to the provisions |
pH值 Ph value | 6.9-7.3 | 符合规定 Conform to the provisions |
渗透压 Osmolality | 270-340 （mosm/KgH2O） | 符合规定 Conform to the provisions |
无菌 Sterility | 无菌 Sterility | 符合规定 Conform to the provisions |
支原体 Mycoplasma | 0.11um过滤，支原体试验为阴性 The mycoplasma test was negative after 0.11um filtration | 符合规定 Conform to the provisions |
细胞生长试验 Cell growth test | 细胞呈克隆状，克隆边缘光滑 The cells are clonal, with smooth edges | 符合规定 Conform to the provisions |
