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品　　牌：APPLIED CELL

产品型号：AC-1001012

适用范围：高教

所在地区：上海 嘉定区

Serum-Free干细胞冻存液

　　产品基本信息

　　产品简介

　　Serum-Free干细胞冻▓存液▆是埃泽思生物（Applied Cell?）自主开发的一款无血清、无需程序降温的干细胞【冻存液，适用于人多能干细胞（hES/hiPS）的冻存。本产品生产过程遵循ISO9001体系,并符合GMP指导原则。

　　产品特性

　　l 安全：无外源蛋白成分，大大降低各类病毒、霉菌和支原体等的污染风∏险。

　　l 稳定：全程无血清生产，批次◆间差异小。

　　l 高效：冻存细胞复苏率高于90%。

　　l 简单：即用型产品，且无需程序降温可直接-80℃过夜后转移至液氮中长期☉保存。

　　产品内容

　　相关产品

　　人多能干∴细胞培养基（Applied Cell?: Cat. no.AC-）

　　人多能干细胞消〖化液（Applied Cell?: Cat. no.AC-）

　　Serum-free细胞冻存液（Applied Cell?: AC-1001006）

　　即用＠型基质胶（Applied Cell?: Cat. no. C-）

　　人iPS细胞（Applied Cell?: Cat. no.AC-）

　　人ES细胞（Applied Cell?: Cat. no.AC-）

　　操作方法

　　细胞冻存

　　1.1  准备对数期生长的干▃细胞，加入人多能干细胞消化液（AC-）消化3~5 min，用2mL人多能干细胞培养基（AC-）制备成细▼胞悬液；

　　1.2  1000rpm 3min离心，弃上清，用1.5-2mL Serum-Free干细胞冻存∴液重悬细胞，细胞密度1×106~1×107 /mL；

　　1.3 转移至冻存管中，无需程序降温，直接将待冻ξ　存细胞置于 -80℃过夜，后转移至液氮中长期保存，冻存时注意直立放置冻存管；

　　细胞复苏

　　2.1  基质胶包被培养板：取出6孔板/12孔板，每孔内◇加入1 mL/0.5 mL即用型基质胶（AC-），轻轻晃动6孔板/12孔板使基质胶完全覆盖皿底，置于37℃培养箱中孵育1h~2h，实验前⌒拿出并置于超净工作台/生物安全柜中室温下平衡20min。如果暂时不用，可用Parafilm封口后2-8℃ 储存，并于1周内使用。

　　注意：①一∩支冻存的干细胞的数量在1×106cells/mL左右，对应6孔板1孔；②即用型基质胶对温度敏感，即用即拿，用完后立即◢放回4℃冰箱保存，且勿用手直接触碰基质胶液面所及的瓶身，影响基质胶★质量。

　　2.2  先将2~3mL的■干细胞培养基加入15mL离心管中∞备用。

　　2.3  解冻：将从液氮中取出的冻存管快速浸入37℃温水中，快速摇动，使其在1~2min内快速解冻；

　　注意：细胞从液氮→中拿出的速度要快，尽量减少其暴♀露在室温中的时间。

　　2.4  离心：冻存管中的冻存液解冻后，将其逐滴加入含有干细胞培养基的15mL离心管中，将15mL离Ψ心管置于低速离心机中配比平衡后，1000rpm离心3min；

　　2.5  重悬：离心后弃上清加1mL人多能干细胞培卐养基对干细胞沉淀进行吹吸混↙匀，吹吸3~5次左右。

　　2.6  接种：吹吸均匀后，将已经平衡好的即用型基质胶弃掉，将吹打均匀的干细胞悬「液加入到已经包被好的6孔板中，并补全◣每孔2mL培养体系。

　　2.7  培养：接种后的6孔板可以置于倒置相差显微镜下＠ 观察接种的干细胞密度以及细胞团块大小，呈4个细胞以上的团块较合格，水平十ω字轻轻晃动6孔板/12孔板使细胞均匀分◆布。并置于37℃，5% CO2的恒温培养箱培养，第2天观察细胞贴壁情∞况；

　　细胞形态图

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分别是人ES细胞复苏24h、48h、72h后的细胞形态图

　　质量控制