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                耐热MMLVReverse Transcriptase (RNase H-) 1000U

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                详细说明


                产品名称:耐热MMLVReverse Transcriptase (RNase H-)

                产品说明:逆转录酶能以RNA或单链DNA为模板起始合成互补的DNA链。MMLV Reverse Transcriptase (RNase H-)是M-MLV逆转录酶的突变型,通过多个点突变去除了RNase H的活性◆中心,提高了酶的热稳定性,增强了与模板的亲和力,减少了逆转录反应中RNA的降解,使cDNA第一链的得率增加,更容易获得全长cDNA

                来源:E.coli菌株,含有突变型莫洛尼氏鼠白血病病毒(M-MLV)逆转录△酶基因。

                产品应用:第一链cDNA的合成;RT-PCR反应。

                产品纯度:200U的本酶和1μg16S23S rRNA37下孵育1h,电泳条带无肉眼可见的变化。耐热MMLVReverse Transcriptase (RNase H-) 1000U

                推荐的反应条件:

                cDNA第一链的合成

                1)在无RNasePCR管中加入:Oligo dT12-18(1μg/μl)或◣随机引物(50-250ng)1μlTotal RNA (10ng-5μg)mRNA(1-500ng)xμldNTP (10mM each)1μlDEPC ddOH2(13-x)μl

                2)70保温10分钟后迅速冰浴2-10分钟。

                3)离心数秒使反应液聚集于PCR管底部。

                4)向上述反应液中加入:5×RT Buffer 4μlRNasin (40U/μl) 1μl;轻轻吸打混匀。

                5) 50保温2分钟(Oligo dT12-18或基因特异引物);如果是随机引物则25保温10分钟。

                6)加入1μl MMLV逆转录酶,混匀后50保温50分钟。

                7)70保温15分钟后置冰上冷却,得到cDNA。该产物可直接用于第二链的合成或RT- PCR扩增反应,保存请置于-20

                耐热MMLVReverse Transcriptase (RNase H-) 1000U

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                耐热MMLVReverse Transcriptase (RNase H-) 1000U

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