[实验准备]福建(厦门、福州、泉州)小鼠生长抑素(SS)ELISA Kit
1. ELISA试剂盒及待测样本
2. 酶标仪(450nm波长滤光片)
3. 高精度移液器,EP管及一次性吸头
4. 37℃恒温箱,双蒸水或去离子水
5. 吸水纸
[样本要求]
1.样本要求:液态类标本(细胞培养上清、组织匀浆、血清、血浆、尿液、胸水、腹水、脑积液等)
2.样本量:每个样本收集体积=120µl*检测指标数 。
3.样本保存:请尽早检测,2-8℃保存一天;需更长时间须冷冻(-20℃或-70℃)保存。如需周期收集样本,请将样本及时分装标号后〇,置-20℃或-70℃保存。
一、代测
我公司还提供酶联免疫试▲剂盒(ELISA试剂盒)代测服务。
二、定制
可以根据客户的需求,由客户提供抗体,或者委托我们采购抗体,进行定制。
三、其他相关产品:
人胰岛素(INS)酶联免疫试剂盒(ELISA试剂盒)
人胰岛素原(Pro-INS)酶联免疫试剂盒(ELISA试剂盒)
人胰岛素样生长因子I (IGF-I)酶联免疫试剂盒(ELISA试剂盒)
大鼠胰岛素(INS)酶联免疫试剂盒(ELISA试剂盒)
大鼠胰岛素原(Pro-INS)酶联免疫试剂盒(ELISA试剂盒)
小鼠胰岛素(INS)酶联免疫试剂盒(ELISA试剂盒)
四、样本处』理方法汇总表
(一)液体样本
液体样本处理原则:所有的液体样本,用无『菌管收集,2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),如果以后碰到其他的液体样本,也按这个方法,纳入汇总表。
1、血清:用无菌管】收集№,室温血液自然凝固10-20分钟,2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔▲细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离∮心。
2、血浆:应根据标本的要求选择EDTA、肝素钠或柠檬酸钠作为抗凝︼剂,混合10-20分钟后,2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔细收集〓上清,保存过程中如◥有沉淀形成,应该再次离心。
3、尿液:用无菌管收集,2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集〖上清,保存过程中如「有沉淀形成,应再⌒次离心。
4、胸腹水:用无菌管收集,2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔细收集上清,保存Ψ过程中如有沉淀形成,应ω再次离心。人肿瘤坏死因子α诱导蛋白3(TNFAIP3)ELISA福建(厦门、福州、泉州)小鼠生长抑素(SS)ELISA Kit
5、脑脊液:用无菌管收集,2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔细收集上清,保存过程中◥如有沉淀形成,应再次㊣ 离心。((采集大鼠脑脊液)的方法:采集脑脊液时,用湿纱布擦试大鼠颈背部皮肤,剪去背毛暴露皮〒肤。两耳连线剪一横切口((1. 5cm左右),在其中点向尾侧沿皮下剪开2cm,将皮→分离两侧,扩大视野。紧贴大鼠头骨依次逐层剪切各肌层,并断端依次拉向尾侧扩大视野。注意,有出血时用№干纱布按压止血,保持术▲口清晰。接近颈后♂黄韧带时,小心地用7号注射针头分离附盖的肌肉,暴露寰枕膜。用lml注射器(针头用止血钳使针尖与针体成150度钝角),针斜面向上,针尖→端近水平刺入蛛网膜下腔,固定针体,缓慢抽取脑脊↙液,一般采集量为100-200微升。)
6、唾液:用无菌管收集,2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔细收集上清,保存◤过程中如有沉淀形成,应再次∑离心。福建(厦门、福州、泉州)小鼠生长抑素(SS)ELISA Kit
7、细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
8、牛奶:用无菌管收集,2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
9、蜂蜜:用无菌管收集,2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
10、全血:用含有抗凝剂的无々菌管收集,立即轻轻摇动,来回轻轻颠倒数次,使血液和抗凝剂∞混匀,以防血液凝固。
(二)固体样本
固体样本处理原则:称取1g的固体样本←,用9g的合适↑缓冲液溶解,分泌蛋白可以直接离心︻取上清检测,细胞内的蛋白,要先收集细胞∑ ,再用合适方法破碎,离心取◥上清测试∩。
1、组织标本:切割标本后,称取1g组织,加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS,用手工或匀※浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔细收集上清。分装一份待检测,其余冷冻备用,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。对于植物组织,不好匀浆的话,就在□ 液氮中充分研磨;
2、细胞内蛋白样本
许多待测蛋白不是分泌蛋∩白,而是存在于细胞内的蛋白,这个时候,要先收集细胞,洗涤干净,再破碎细胞,离心取上清。
(1)培养的细胞
A、动物细胞:用PH7.2-7.4的PBS稀释细胞★悬液,使细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融(如果反复冻融,破碎效果不好,就采用超声ζ波破碎),以使细胞破坏并放出细胞内成份。2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
B、植物细胞:用PH7.2-7.4的PBS稀释细胞悬液,使细胞浓度达到100万/ml左右,置于ζ 冰盒上,用超声破碎仪,设置破碎2s,冷却30s的方式,充分破碎细胞,以使细胞破坏并放出细胞内成份。2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
(2)组织ぷ的细胞
切割标本后,称取1g组织,加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS,用手工或匀浆器将标本匀浆充分。2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),去除上清,再用pH7.2-7.4左右的PBS小心洗涤沉淀的细胞三遍。再用上述的细胞破碎方法破碎细胞。
3、土壤:称取1g土壤,加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS,用手工将标本充分【混匀。2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔细收集上清。分装一份待检测,其余冷冻备用,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。如果是测分泌蛋白,直接取上ㄨ清检测,测试细胞内蛋白,要破碎细胞。
4、咽拭子:加入2g的pH7.2-7.4左右的PBS,溶解咽拭子头部,摇匀,用镊子取出咽▆拭子并挤干液体,2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔细收集上清。分装一份待检测,其余冷冻备用,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。如果是测分泌蛋白,直接取上清检◤测,测试细胞内蛋白,要破碎细胞。
5. 植物标本的精采集及保存人肿瘤坏死因子α诱导蛋白3(TNFAIP3)ELISA
1、称取0.1g(误差±3%以内)新鲜植物组织样本,在液氮中充分研磨;
2、加入1ml的提取液(80%甲醇),置于-20度过夜;
3、于4度,8000rpm,离心1小时,取上清;
4、上清液过C-18固相萃取柱。具体步骤是:80%甲醇(1ml)平衡柱→上样→收集样品→移开样品后用100%甲醇(5ml)洗柱→100%(5ml)洗柱→100%甲醇(5ml)洗柱→循环。过柱后的样本真空干燥或氮气吹干,保存备用;
5、上样前加◆入pH7.4PBS缓冲液(1ml定容)。混匀后室温放置30分钟,然后4度离心(8000rpm,15分钟),取上清并暂时保◎存于4度待用。山西现货人肿瘤坏死因子α诱导蛋白3(TNFAIP3)
6.植物标本中相关酶或蛋白的测定:(粗提取)
1、新鲜植物组织请在液氮中充分研磨;
2、加入样品体积9倍的提取¤液(pH7.4PBS缓冲液),3、请于4度,8000rpm,离心30分钟,取上清并暂时保存于4度待用。
(三)样本收集注意事项山西现货人肿瘤坏死因子α诱导蛋白3(TNFAIP3)
1、不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根卐过氧化物酶的(HRP)活性。
2、标本采集后尽快进行实验,若不能马上进行试验,可将标々本放于-20℃保存,但应避免反复冻融。
3、我们罗列的是通用的样本处理方法,无法涵盖各种样本,对于一█些特殊样本,建议实验人员多参考已发表的文献,自行设计合理的样本处理方法。
福建(厦门、福州、泉州)小鼠生长抑素(SS)ELISA Kit