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基孔肯亚热快速检测试剂盒
详细说明
基孔肯雅热（chikungunya fever）是由基孔肯雅病毒(chikungunya virus, CHIKV)引起，经伊蚊传播，以发热、皮疹及关节疼痛为主要特征的急性传染病。1952年首次在坦桑尼亚证实了
基孔肯雅病毒
基孔肯雅热流行，1956年分离到病毒。本病主要流行于非洲和东南亚地区，近年在印度洋地区造成了大规模流行。该病临床症状与登革热类似，容易误诊。虽然病死率很低，但在蚊媒密度较高地区易形成大规模暴发和流行。
中国曾于80年代报道在云南人群中发现存在基孔肯雅病毒感染，近期检疫部门又在赴斯里兰卡务工回国人员中检出输入性病例。为指导临床医生和传染病预防控制专业人员做好基孔肯雅热输入疫情的监控，做好蚊媒密度监测和控制，有效防范和处置疾病的本地传播和流行，制定本技术指南。
基孔肯亚热抗体检测试剂盒能快速检测人体血清中基孔肯亚病毒。
基孔肯雅热检测试剂盒
【预期用途】
基孔肯雅IgG抗体ELISA检测试剂盒主要用于定性检测人血清和血浆中抗基孔肯雅病毒的IgG抗体。
【实验原理】
此试剂盒基于ELISA技术。包被板中包被了抗人IgG抗体，如果人血清或血浆中含有IgG时，则会与其特异性结合，洗板将未结合的物质洗去， 然后加入基孔肯雅抗原溶液，洗板洗去未结合的物质，然后加入链霉亲和素和基孔肯雅抗体酶联物。洗板后，加入TMB底物液，颜色变成蓝色，加入终止液终止反 应，颜色由蓝色转为黄色，最后用酶标仪在450nm处读数。
【试剂组成】
包被板：12×8可拆卸，包被了抗人IgG抗体，密封在可重封铝箔袋中
基孔肯雅溶液1：1瓶包含6mL的基孔肯雅抗原溶液，即用，白盖
基孔肯雅溶液2：1瓶包含6mL的生物素化的基孔肯雅抗体，即用，蓝色，白盖
基孔肯雅IgM阳性质控：1瓶，1.5mL，黄色，即用，红盖
基孔肯雅IgM临界质控：1瓶， 2mL，黄色，即用，绿盖
基孔肯雅IgM阴性质控：1瓶，1.5mL，黄色，即用，蓝盖
样本稀释液：1瓶包含100mL的即用缓冲液，用于稀释样本，pH7.2±0.2，黄色，白盖
洗涤液：1瓶，包含50mL 20倍浓缩的缓冲液，（pH7.2±0.2）用于洗板，白盖
链霉亲和素结合液：1瓶包含6mL过氧化物酶结合的链霉亲和素，即用，红色，黑盖
TMB底物液：1瓶包含15mL TMB，即用，黄盖
终止液：1瓶包含15mL，即用，内含硫酸，0.2mol/l，红盖
【需要的设备和材料】
固定板
封板片
酶标仪（450/620nm）
37℃孵箱
洗瓶或自动洗板机
10~1000μL的移液器
漩涡混匀器
蒸馏水或去离子水
一次性试管
计时器
【储存和稳定性】
试剂在有效期内，储存于2-8℃稳定
【试剂准备】
洗涤液的准备
用双蒸水稀释洗涤液，例子：10ml洗涤液+190ml双蒸水。稀释好的洗涤液在室温下5天内有效。
【样本的采集和准备】
这个实验中使用的样本是人血清和血浆，如果实验在样本采■集后的5天内进行，则需要储存在2-8℃，否则，必须于-20℃到-70℃深度冻存。如果样本是深度冻存的，在使用前，则需要充分混匀，避免反复冻融。
不推荐使用热灭活︻的样本
【样本的稀释】
将10μL样本跟1ml的样本稀释液混匀，并用漩涡混匀器充分混匀。
【实验步骤】
在开始试验前，请仔细阅读试验说明。结果的可信度是依赖于严格地按照实验说明来进行的，铺板时最少留1个孔为空白对照（A1）1个阴性质控孔（B1）2个临界质控孔（C1+D1）1个阳性质控孔（E1）。开始试验前，请将所有试剂都平衡到室温
1.吸取50μL的质控品和稀释过的样本到相应的孔中，留A1孔做空白对照孔
2.封板
3.在37±1℃下孵育1小时±5分钟
4.当孵育完成时，揭去封板片，弃去反应液，每孔300μL洗涤液，洗板3次，避免溢出。每孔浸泡的时间都必须＞5秒，最后拍板将残留的液滴都拍去。
5.吸取50μL基孔肯雅溶液1到除了空白对照孔的每个孔中，盖板
6.在室温孵育30分钟
7.重复步骤4
8.将基孔肯雅溶液2跟链霉∮亲和素结合物混匀10分钟
9.吸取50μL基孔肯雅溶液2跟链霉亲和素的复合物到除了空白对照孔的每个孔中，盖板。
10.室温孵育30分钟
11.重复步骤4
12.吸取100μL TMB底物液到每个孔中
13.避光孵育15分钟（精确）
14.加入100μL终止液到每个孔∮中，与加TMB底物液时的间隔和顺序都必须一样
15.用酶标仪在加入终止液后30分钟内与450/620nm处检测
【检测】
调整酶标仪，以空白对照孔调零，以450nm处检测所有孔的吸光度值。
【结果】
1.检测生效的条件
只有以下条件符合，检测的结果才能认为的有效的
空白对照孔 吸光度值＜0.100
阴性质控孔 吸光度值＜临界质控
临界质控孔 吸光度值0.150-1.300
阳性质控孔 吸光度值＞临界质控
如果以上条件不符合的，那么试验结果则是无效的，需要重新检测
2.结果的计算
临界质控平均吸光度值的计算，例子：吸光度1：0.39；吸光度2：0.37
（0.39+0.37）/2=0.38
平均吸光度值为0.38
3.结果的说明
样本如果是比临界值高出10%，则认定为阳性，
样本如果是在临界值上下10%之内，则认定为灰色区（推荐在2-4周之后再次检测新鲜的样本，如果样本仍然是灰色区，可以直接认为是阴性）
样本如果是比临界值低出10%，则认定为阴性
4.结果的单位
病人样本平均吸光度值×10 = U
临界值
例子： 1.216×10 =32U
0.38
临界值： 10 U
灰色区：9-11 U
阴性： ＜9 U
阳性： ＞11 U
