Western blot技术服务

 

 

Western Blot
是以电泳分离蛋白组分，再将其从凝胶转移到一种固相支持物，继之以特异性抗体杂交的一种传统经典分子生物学技术，也称免疫印迹(immunoblotting)。由于免疫印迹具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫测定←的高特异性和敏感性，一直做为蛋白分析的常规检测技术在广泛使用。免疫印迹用于鉴定样本中目标蛋白的存在和初步量化分析。
 
服务内容描述：
提供全套免疫ζ　印迹服务。
1.蛋白质抽提
a.实验对象为组织样品，取适量（250~500mg）新鲜组织样品或正『确保存的组织样品，加1ml含蛋白酶抑制剂的总○蛋白抽提试剂（或核蛋白抽提试剂），匀浆后抽提总蛋白（或核蛋白）。
b.实验对︽象为细胞样品，每份样∞品取1×10⁶ ～1×10⁷ 细胞，PBS清洗细胞，去PBS加0.1ml~1ml含蛋白酶抑制剂的总蛋白抽提↑试剂（或核蛋白抽提试剂）抽提总蛋白（或核蛋白）。
2.蛋白质定量
用经典的Bradford法测定样品浓度。
3.免疫印迹实验
客户方需提供：
1.一抗(建议客户选用有╲品质保证的一抗，以权威文献中报导的抗体↘为准，如CST、ABcam、Zymed等著名抗体公司)。
2.预实验样本（根据情况）
3.正式实验样本
  同时要求客户提供详尽的实验信息，如：样◆本质量描述，目的蛋白★相关资料，是否做过实验及碰到的主要问题等等。

服务流程：
预实验：
如样本数目比较大、或样ξ本量稀少比较珍贵时建议做预实验，以检测抗体质量和客户的样本情况。由于抗体的质量对于实验的成败至关重要，建议选用有质量保证的品牌抗体。
具体流程如下：
1．客户样本做蛋白含量测定，确定合适的上样量。
客户提供的样本若干2－3个做对照基因β-actin检测,如此步结果正常，进入目标基因测试。
2．根据客户提供的一抗和客户提供的样本做目标基因测试，确定抗「体的合适用量，摸定反应条件，一抗用量选用说明书推荐的上限偏高（最浓的）浓度如说明书推荐一抗稀释度在1：200，到1：20000之间，则我们初次实验选用1：200，如实验没有信号，再次确认后通知客户换抗体，如结果有目标信号则再根据结果╲摸定合适的反应条件，进行正式实验。
 
正式实验：
根据预实验摸定的反应条件，逐步分阶段进行正式实验，同时随时通知客户反应进程，调整实验。
 
服务方提供：蛋白显色图谱。
验收标准：蛋白显色图谱，条带清晰，对照基因基本一致。