酵母双杂交cDNA文库构建

 

特点
→ 技术平台：Cloneminer II cDNA library construction kit (cat. No A11180)
→ 采用Invitrogen专利的Gateway位点特异性重组技术(Cloneminer II cDNA library construction kit)构建，使可能有相互作用的蛋白的下游表达和分析比以前更加方便
→ 通过使用三种报告基因和低拷贝数的载体，ProQuest™系统可以得出最低假阳性的可信结果。
→ 使用基于GAL4转录因子重建系统确定相互作用

原理
酵母双杂交技术产生以来，它主要应用在以下几方面：
(1) 检验一对功能已知蛋白间的相互作用。
(2) 研究一对蛋白间发生相互作用所必需的结构域。
(3) 用已知功能的蛋白基因筛选双杂交cDNA文库，以研究蛋白质之间相互作用的传递途径。
(4) 分析新基因的生物学功能，即以功能未知的新基因去筛选文库。ProQuest™系统依靠报告基因的转录激活来鉴定蛋白相互作用。将一个基因克隆到"诱饵"载体，pDEST™ 32，并和GAL4蛋白的DNA结合域(DBD)表达为融合蛋白。将第二个基因或者编码可能的相互作用子蛋白的cDNA文库克隆到"猎物"载体，pDEST™ 22，同GAL4的转录激活域(AD)表达为融合蛋白。当两个蛋白相互作用时，AD和DBD间距离被拉近，从而激活报告基因的表达。

服务流程
酵母双杂交cDNA文库构建
1) 提取总RNA，分离mRNA
2) 使用Cloneminer II cDNA library construction kit构建酵母双杂交文库
客户提供
1) 样品至少2g组织或1 x 10e7个或至少足够提取0.5mg总RNA的细胞
2)至少0.5mg的总RNA
我们提供
文库菌株(含20%甘油的SOC培养基)和文库构建报告(包括总克隆数CFU的鉴定图，文库单克隆菌落PCR鉴定图)
质量保证
→ 文库含有至少5 x10e6个原始克隆
→ 平均插入片断大小>1.2 kb
→ 有超过90%的克隆含有插◥入片段