原位杂交
 

 

 原位杂交实验技术服务

原位杂交原理：
       原位杂交组化（简称原位杂交，in situ hybridization histochemistry；ISHH）属于分子杂交的一种，是一种应用标记探针与组织细胞中的待测核酸︽杂交，再应用标记物相关的检测系统，在核酸原有的位置将其显示出来的一种检测技术。原位杂交的』本质就是在一定的温度和离子浓度下，使具有特异序列的单链探针通过碱基互补规◣则与组织细胞内待测的核酸复性结合而使得组织细胞中的特异性核酸得到定位，并通过探ζ针上所标记的检测系统将其在核酸的原有位置上显示◆出来。
       探针的种类按所带标记物可分为同位素标记探针和非同位素标记∞探针两大类。同位素标记物虽然有灵敏性高，背底较为清晰等优点，但是由于放射性同位素对人和环境均会▲造成伤害，近来有被非同位素取代的趋势。非同位素标记物中目前最常用的有生物素、地高辛和荧光素三种。
       探针的种类按核酸性质不同又可分为DNA探针、cDNA探针、cRNA探针和合成寡核苷酸探针。cDNA探针又可分为双々链cDNA探针和单链cDNA探针。原位杂交又可分为菌落▆原位杂交和组织原位杂ξ　交。菌落原位杂交（Colony in situ hybridization）是将细菌从培♀养平板转移到硝酸纤维素滤膜上，然后将滤膜上的◇菌落裂菌以释出DNA。将DNA烘干固定于膜上与32P标记︼的探针杂交，放射自显影检测菌落杂交信号，并与平板上的菌落对位。组织原位杂交∮（Tissue in situ hybridization）组织原位杂交简称原位杂交，指组织或细胞的原位杂交，它与菌落的原位杂◢交不同。菌落原位杂交需裂解细菌释出DNA，然后进行杂交。而原位杂交是经适当处理后，使细胞通透性增加，让探针进入细胞内与DNA或RNA杂交。
主要器材：
医用微波※炉，恒温→水浴箱、湿盒、PNP笔等。
客户需知：
实验条件：切片机(石蜡和冰冻)                           交货时间：10－20天
结果提供：实验组玻片和∏1张杂交阳性信号的▼数码照片
客户提供：1)样本：组织、细胞或切片、细胞爬片
               2)探针或基因资料(可由本公司代为设↙计(免费)，并合成与标记)
样本要求：DNA原位杂交：组织及时固定
               RNA原位杂交：所有试剂和样本容器包括固定液均用0.1%DEPC水处理24h，并高   压灭菌；组织离体后30min内及时固定，或-70℃以下冻存。