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品　　牌：biovol

所在地区：上海

• 克隆目的基因到穿梭载体（中介载体）及鉴定

• 如果原始质粒与本系统所用穿梭载体有匹配酶切位点，采用相应的内切酶切下▲相应片断，回收并连接到穿梭载体。酶切，测序鉴定；
• 如果原始质粒与本系统所用穿梭载体没有匹配〓酶切位点，设计带有特殊接头的引物进行PCR扩增，得到目的片断，采用相应的内
  切酶切下相应片断，回收并连接到穿梭载体。酶切，测序鉴定；
• 对于不适用于以上◣方案或者有特定要求的样品，与客户协商定制具体实施方案

• 将鉴定正确的基◆因克隆到慢病毒载体，与辅助载体一起转染293T细胞进行包↙装；
• 将包装好的病毒超速离心收集；
• 将浓缩病毒进行滴定，滴定结果单位为PFU/ml（一般为5×108 PFU/ml以上，体积为500μl以上，根据客户需要，不同量有价格差异）

• 测序鉴定
• 根据特定引物作RT-PCR鉴定
• 蛋Ψ 白表达鉴定（根据客户要求并由客户提供高特异性抗体）

• 插入目的片段序列信息，原始载体序列信息，载体图谱，酶切分析图等。
• 鉴定正确的原始质粒，PCR引物及PCR鉴定方法说明（包括PCR体系及PCR条件）（非必需，或需协商），测序引物（非必需，或需协
  商）。
• 原始质粒的酶切鉴定报告、测序报告，如果客户确定基因的信息无误，这条非必需。
• 实验目的、要求，目的基因有无细胞毒性，是否需Ψ要构建对照病毒？
• 实验要求包括：是否自行构建腺病毒载体？是否要求更换启动子、polyA等基因元件？
• 实验目的包括：用于细胞〖实验还是动物实验，需要感染的细胞类型或动物模型类型。

• 构建腺病毒/慢病毒载体的时间约15到25个工作日。病毒的包装，扩增的时间约∑　20到30个工作日。总计需要45-55个工作日。
• 提供重组穿梭载体或者siRNA载体，重组腺病毒载体的酶切及测序报告。
• 免费提供一管阴性对照（仅限通用型的，如果客ξ户指定的序列，需要另外计费）。
• 最大插入片段5kb－8Kb。

• 如果客户需更换启动子，需保证所插入的基因的表达产物对细胞无毒〖害作用，
• 如果插入的目的片段太长，客户要求测序验证全长，需要提供基因的特异引物，以测得全长，加收一定的费用。

腺病毒载体系统和慢病毒载体系统比较
病毒表达系统	腺病毒表达系统（Adenovirus）	慢病毒表达系统（Lentivirus）
病毒基因组	双链DNA病毒	RNA病毒
复制	自主复制	自主复制
是否整合	病毒基因组游离于宿主基因组外，瞬时㊣表达外源基因	病毒基因组整合于宿主基【因组，长时间、稳定表达外源基因
			感染细胞类型	感染分裂和」不分裂细胞	感染分裂和不分裂细胞，适合难转染的原代细胞（如神经细◤胞，淋巴细胞）及体内实验
表达丰度	高水平表达	中水平表达
表达时间	快（1-2 天）	慢 (  1-3天 )
滴度	滴度高达1011pfu/ml	滴度最▆高可达108 pfU/ml
克隆容量	可插入高达8kb的外源片段，滴度随插入片ㄨ段长度增加而降低	可插入不超过8kb的外源片段，滴度随插入片段长度增加而降低
免疫原性	高免疫原性	低免疫原性