每张膜可以上8个样品，检测一种蛋白
是以电泳分离蛋白组分，再将其从凝胶转移到一种固相支持物，继之以特异性抗体杂交的一种传统经典分子生物学技术，也称免疫印迹▃(immunoblotting)。由于免疫印迹具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫测定的高特异性和敏感性，一直做为蛋白分析的常规＠检测技术在广 泛使用。免疫印迹●用于鉴定样本中目标蛋白的存在和初步量化分析。
服务内容描述：
提供全套免疫印迹服务。
1.蛋白质抽提≡
a.实验对象为组ξ 织样品，取适量（250~500mg）新鲜组织样品或正确保存的组织样品，加1ml含蛋白酶抑制剂的总蛋白抽提☆试剂（或核蛋白抽提试剂），匀浆『后抽提总蛋白︼（或核蛋白）。
b.实验对◇象为细胞样品，每份样品取⌒ 1×106 ～1×107 细胞，PBS清洗细胞，去PBS加0.1ml~1ml含蛋白酶抑制剂的总蛋白抽提试∑ 剂（或核蛋白抽提试剂）抽提总蛋白（或核蛋白）。
2.蛋白质定量▼
用经典的Bradford法测定样品浓度。
3.免疫印迹实▼验
收费标准
| 材料 | 服务内容 | 规格 | 单价（元） |
| 细胞或组〓织 | 蛋白提取 | 每样品 | 免费 |
| 提取好的蛋∩白 | 蛋白杂交 | 目的基因（每张膜1～8个样品)） | 1200元每张（量大电询） |
| 提取好的蛋白 | 蛋白杂交 | 内参基因（每张膜1～8个样品)） | 800元每张（量大电询） |
| 注：预实验800/指标 | |||
客户方需提供 ：
1.一抗(建议客户选用有品质保证的一抗，以权威文献中报导的抗体为准，如CST、ABcam、Zymed等著名抗◢体公司)。
2.预实验样本（根据情况）
3.正式实验样本
同时要求客户提╱供详尽的实验信息，如：样本质量描述，目的蛋白相∞关资料，是否做过实验及碰到的主要问题等等。
样品要求 客户需新鲜或正确保存的蛋白样品，目的蛋白阳性表达样品（有阳→性表达的细胞或组织）， 检测目的蛋白的一抗（或由奥普生物代购）。样品要求为：
·裂解样品总蛋白∏量>500ug/样品。
·细胞样品总蛋白浓度＞1mg/ml。
·组织Ψ样品总蛋白浓度10-15mg/ml。
终产品 ·曝光结果（胶片和扫描图）；
·完整实验报告。
服务说明 ·建议提供目的蛋白阳性表↙达样品（纯蛋白或有阳■性表达的细胞或组织）作为阳性对照。
·每张膜可检测1-8个样品。
·一抗需在正∏确条件下保存，避免污染及反复冻融。
服务流程：预实验：
如样本数目比」较大、或样︻本量稀少比较珍贵时建议做预实验，以检测抗体质量和客户的样本情况。由于抗体的质量对于实验的成败至关重要，建议选用有质◣量保证的品牌抗体。
具体流程如下：
1．客户样本做蛋白含量测定，确定合适的上样量。
客↓户提供的样本若干2－3个ω做对照基因β-actin检测,如此步结果正常，进入目标基因测试。
2．根据客户提供的一抗和客户提供的样本做目标基因测试①，确定抗体的合适用量，摸定反应条件，一抗用量选用说明书推荐的上限偏高（最浓的）浓度如说明☉书推 荐一抗稀释度在1：200，到1：20000之间，则我们初次实验◆选用1：200，如实验没有信号，再次确认后通知客户换抗体，如结果有目标信号则再根据 结果摸定合适的↑反应条件，进行正式实验。
正式实验：根据预实验摸定的反应条件，逐步分阶⌒段进行正式实验，同时随时通知客户反应进程，调整实验。
Western blot操作流『程介绍
1. 蛋白质抽提
(1) 组织样品，取适合量的新鲜组织样品或正确保存的组织样品（非常重要），加1ml 含蛋白酶抑制剂的总蛋白抽提试剂或其它蛋白提取试剂，匀浆后抽提总蛋白或核、膜蛋白。
(2) 细胞样品，每份样品取1×106～1×107细胞，用PBS清洗细胞，去PBS加0.1-1ml含蛋白酶抑制剂的总蛋白抽提试剂或其它蛋白提取试剂抽提总蛋白或核、膜蛋白。
2. 蛋白质定量：BCA蛋白检测试剂检测蛋白的浓度。
3. 变性聚丙烯酰胺不连续凝胶电泳（SDS-PAGE），用微量加样枪准确加〖样到相应的加样孔中，安装□ 电泳分离蛋白。
4. 蛋白转移到硝酸纤维膜或PVDF膜上。按Bio-Rad蛋白转移装置说明组装滤纸凝胶纤维素夹层，30mA恒流条♀件下，4℃转移过夜。
5. 膜的封闭和抗体孵育
(1) 膜在5%BSA溶液中室温孵育1小时以♂封闭膜上的非物异结合。
(2) 封闭过的膜加入一级抗体室温孵育膜1.5h,抗体抗原结合。
(3) 加入HRP标记的二ぷ级抗体以结合一级抗体及HRP标记的抗生物素抗体以结合分子量 标准，室温孵育膜1小时，加入HRP标记的GAPDH/b-actin抗体可以同时检测GAPDH/b-actin含量。
6. 结果检测：化学发光法检【测，膜与化学发光底物孵育，经X光胶片曝光显〓影。
公司承诺
1. 实验所需试剂及耗材由本公司免费提供，用户无须另行购买。
2. 我方负责对客户提供的样品◤进行蛋白提取、电泳及Western杂交检测∑技术服务，并提交给甲方电子版检测报告，包括详细操作程序和实验结果等
3. 我方对实验结果▆以及客户所提供的资料保密，未经客户许可，我方不得将客户的实验内容、实验结←果和相关信息对外公布。
4. 具体以服务合同内条款为主
