一、Rna干扰-Lentivirus介导的siRNA实验-慢病毒包装的意义
慢病毒载体（Lentiviral vector）较逆转录病毒载体有更广的㊣宿主范围，慢病毒能够有效感染非周期性和有丝分裂后的细胞。慢病毒载体能够产生表达siRNA的高滴度的慢病毒，在周期性和非周期性细胞、干细胞、受精卵以及分化的后代≡细胞中表达siRNA/miRNA，实现在多种类型的细胞和转基因小鼠中特异而稳定的基因表达的功能性沉默，为在原代的人和动物细胞组织中快速而高效〇地研究基因功能→，以及产生特定基因表达降低的动物提供了▲可能性。慢病毒作为siRNA/miRNA的携带者，不但具备特异性地使基因表达沉默的能力，而且充分发挥了慢病毒载体自身所具备●的优势Ψ，为基因功能的研究提供了更强有力的工具。
二、Rna干扰-Lentivirus介导的siRNA实验-慢病毒包装的原理
慢病毒（Lentivirus）是逆转录病毒的一种。构建的siRNA / miRNA慢病毒载体，与化学合成的〒siRNA 和基于瞬时表达载体构建的普【通 siRNA 载体相比，一方面可以扩增替代瞬时表达载体使用，另一方面，Lentivirus-siRNA 克隆经过慢病毒包装系统包装后，可用于感染依靠传统ξ 转染试剂难于转染的细胞系如原代ω细胞、悬浮细胞和处于非分裂状态的细胞，并且在感染后可以整合到受感染细胞的基♀因组，进行长时间的稳定表达。
三、Rna干扰-Lentivirus介导的siRNA实验-慢病毒包☆装的简单流程
1） 含有目的基因的慢病毒 RNAi 干扰载体的构建和质粒纯化提取。
2） 慢病毒载体，包装系统︼共转染病毒包装细胞293T等。
3） 培养 48hrs - 72hrs 左右，收集含有病毒的上清培养液。
4） 病毒的纯化和浓缩。
5） 分装，- 80 ℃保存。
6） 滴度测定目的基因检定，并出具检测报》告。
四、Rna干扰-Lentivirus介导的siRNA实验-慢病毒包装存在Ψ 的问题
尽管慢载体的研究有了很大进展，但距离临床应用还有很长的路要走。首先，重组病毒的滴度还不够高，除Naldini等报道的结果ぷ外，其余均在101TU/ml～103TU/ml之间，难以达到体内应用的需要；其次，由于HIV复杂的生物学性质，要像目前常用的小鼠逆转录病毒载体那样建↑立稳定的HIV载体包装细胞十分困 难，已建立的包装细】胞均不理想。据报道，Vpr是一种使细胞进入静止期的强诱导剂，也是建立包装细胞的主要障∏碍之一。如果确如前文所述，包装」质粒中的vpr基因并非必需、去除后不影响载体的转导能力，则建立稳定的包装细胞是大有希望的。
在保证HIV-1载体『的安全性上，迄今已做Ψ了种种努力，要产生有复制力的HIV，必须在不同的质粒上发生多次非同源重组事件。即使如此，一︽旦用于人体试验，仍然不能打消人们对感染有△复制力的HIV-1的顾虑。更为谨慎的做法是，以非人类的慢病毒为基础构建载体，如猴免疫缺损〓病毒(SIV)、猪和牛免疫缺损病毒(FIV和BIV)、马传染性贫血病病∩毒等，而目前这些工作尚属空白。
Rna干扰-Lentivirus介导的siRNA实验-慢病毒包装
我们公司提供Rna干扰-Lentivirus介导的siRNA实验-慢病毒包装。如果ω您有需要可以拨打我们的服务电话021-51262103或发送邮件至邮箱来询价。
Rna干扰-Lentivirus介导的siRNA实验-慢病毒包装技术服务详细描述
Lentivirus 载∴体的技术特点
大大提高对于一些较难转染的细胞， 如原代细胞、干细胞、不分裂的细胞等。
导效率快速获得高水平的表达目的基因整合到宿主细胞基因组的几率大大增加
将免疫反应降到最低√
能够插入大的片段(~7.5 kb)
能够应用于干细胞研究
最低的细胞毒性
本公司使用的慢病毒表达系卐统，它由三部分组成：
慢病毒表达载体※
慢病毒包装质粒
可产生假病毒颗粒的细胞系
慢病毒表达载体包含了包装、转染、稳定整合所需要的↙遗传信息。慢病毒包装质粒可提供所有的转录并包装RNA到重组的假病毒载体所需要的所有辅助蛋白。为产生高滴度的病毒颗粒，需要利用表〗达载体和包装质粒同时共转染」细胞，在细胞中进行病毒的包装，包装好的假病毒颗粒分泌到细胞外的培养基中，离心取∑ 得上清液后，可以直接】用于宿主细胞的感染，目的基因进入到宿主细胞之后，经过反转录，整合↓到基因组，从而高水平的表达效应分◎子。
Rna干扰-Lentivirus介导的siRNA实验-慢病毒□包装技术服务流程
对于RNAi实验模型，拜沃公司可以为您生产高质量的病毒液，服务流程如下：
1、根据目的基因相关信息（序列，序列号等），利用高效的设计软〗件，设计 siRNA序列，针对每条目的基因，我们设计3条siRNA序列，其中1条序列为阴性对照组；
2、根据设计好的 siRNA序列，设计，合成两条互补◤的短片段的DNA；
3、对合∴成好的 DNA片段进行稀◣释，退火，连接到线形化处理过的载体，转化，涂平板，过夜培养；
4、通过 PCR的方法筛选阳性菌落，进行测序，分析测序结【果；
5、对于测◣序正确的重组质粒，提取和纯化高质量的不含内毒素的 siRNA病毒穿梭质粒；
6、利用构建好的质粒做转染实验， 48小时〖后通过实时荧光定量和Western的方法分析目的基因，筛选出一条√最有效的siRNA序列；
7、筛选出的高效重组载体和病毒包装质粒共转←染 293T细胞，进行病毒包装和生产，收⌒ 集病毒液；
8、浓缩、纯化病毒液，测定滴度；
提供高质量的病毒液给客户
| 产品内容 |
服务周期 |
服务价格 |
使用说明 |
文献报道或者客户定制的☆序列的病毒颗粒
（滴度要求：2×108TU）
阴性对照病毒●颗粒
（滴度要求：2×108TU） |
8 周 |
询价 |
1.细胞实验
2.整体实验
3.稳定表达株 |
