GT707转染试剂说明



产品货号：GT707                             规格：1ml
贴壁细胞操作步骤：（以6孔板转染293T细胞为例）
1. 在转染前一天按每孔3～5×105个细胞接种细胞。转染前2~4小时，细胞培养基换成无双抗、无血清完全培养基。转染时细胞密度在70-90％为宜。
2. 转染复合物的制备：
（1）取2μg DNA 用100μl无血清稀释培养基（建议采用OPTI-MEM、无血清DMEM或RPMI1640）稀释，充分混匀，制成DNA稀释液。 
（2）取10μl GT707转染∮试剂加入100μl不含血清和抗生素的培养基中，充分混匀。室温静置5分钟。
（3）将GT707稀释液滴加到DNA稀释液中，轻轻混匀, 室温孵育 10-15 分钟，从而获得222 μl GT707/DNA 复合物。
注意！: 两种溶液的混合顺序对转染结果非常重要，切勿颠倒顺序。
3. 转染 ：
将转染复合物加入到含有细胞和完全培养基的6孔板中，轻柔混匀,培养4～6小时后更换无血清培养基，于37℃ ，5% CO2培养箱中继续培养24～48h。
注意！: 转染后首次换液时间至少需4小时以后，视培养基消耗情况可以适当延长可增加转染效率，如果培养基发黄，需尽快更换培养基。

培养容器 培养面积 需要培养基的量 稀释用培养基的量 DNA转染 RNAi转染
DNA GT707 RNA GT707
96孔板 0.3cm2 100ul 10ul 0.1ug 0.3～0.6ul 5pmol 0.1～0.2ul
48孔板 0.7 cm2 200ul 15ul 0.2ug 0.6～1.2ul 10pmol 0.2～0.4ul
24孔板 2cm2 500ul 20ul 0.4ug 1.2～2.4ul 20pmol 0.4～0.8ul
12孔板 4cm2 1ml 50ul 0.8ug 2.4～4.8ul 40pmol 0.8～1.6ul
6孔板 10cm2 2ml 100ul 2ug 6～12ul 100pmol 2.0～4.0ul
60mm平皿 20cm2 5ml 0.25ml 4ug 12～24ul 200pmol 4.0～8.0ul
100mm平皿 60cm2 15ml 1.5ml 8ug 24～48ul 600pmol 12～24ul
125ml摇瓶 30ml 3ml 50～120ul 30～50ul
备注：1、“稀释用培养基的量”指稀释DNA（或RNA）及培养基的培养基用量。如6孔板转染时，分别用100ul的培养基稀释DNA及培养基。
2、如用于同时共转染多种质粒，DNA的用量指每种质粒用量的总和，这时如需得到较高转染效率，建议将DNA的用量和转染试剂的用量同步提高2-3倍。

悬浮细胞操作步骤：（以转染30ml CHO-S细胞为例）
1. 在转染前一天按6～7×105个细胞/ml接种细胞，待转染时细胞密度应在1×106个细胞/ml。
2. 转染复合物的制备：
（1）取20μg DNA 用3ml无血清稀释培养基稀释，充分混匀，制成DNA稀释液。 
（2）取100μl GT707转染试剂加入3ml不含血清和抗生素的培养基中，充分混匀。室温静置5分钟。
（3）将3ml GT707稀释液滴加到3ml DNA稀释液中，轻轻混匀, 室温孵育 10-15 分钟，从而获得6ml GT707/DNA 复合物。

3. 转染 ：
将6ml GT707/DNA 复合物加入到含有30ml细胞和无血清完全培养基的125ml摇瓶中，轻柔充分混匀，125rpm，37℃ ，8% CO2细胞培养摇床中继续培养24～96h。


转染条件Ψ 优化：
由于DNA和转染试剂的用量比值是决定转染效率的重要因素，同时由于各实验室质粒↓的定量误差，质粒纯化程度不同以及细胞状态不同，造成不同细胞和实验室的最优实验条件的差异，为取得最高的转染效率，初次应用时，建议先进行优化。最优条件确定后，实验的结果将非常稳定。下表列出了在24孔板的优化方案，供参考。

24孔板优化方案
号 1 2 3 4
每孔DNA的量（μg） 0.4 0.8 0.8 2
每孔GT707转染试剂量（μl） 1.2 2.4 4.0 6
每孔RNA的量（pmol） 10 20 20 40
每孔GT707转染试剂量（μl） 0.2 0.4 0.8 0.8

根据预实验的最优化条件，按培养器皿表面积比例应用到其他培养容器。