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样本处理及要求：
1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清↓，保存过程中如出现沉淀，应再●次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为〓抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有卐沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌↑管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形∩成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细Ψ胞培养上清：检测分◇泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度□ 达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成∞，应再次离心。
5. 组织标本：切割标本后∑ ，称取重量。加入一定量⊙的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷∞冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关ㄨ文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将♀标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.
7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
ELSIA试剂盒 检测标本：包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等。
实验ぷ条件的选择：1、固相载体的选择：许多物质可作为固相载体，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维【素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载¤体，在使№用前均可进行筛选：用等量抗原包被，在同一实验条件下进行反应，观察其显色反应是否均一性，据此判明其吸附性能是否良好。
2、包被抗体（或抗原）的选择：将抗体（或抗原）吸附在固相■载体表面时，要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0～9.6之间。吸附温度，时间ω及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃ 18～24小时。蛋白质包被的最适浓度需进行滴定：即用不同的蛋白质浓度（0.1、1.0和10μg/ml等）进行包被后，在其它试验条件相同时，观察阳★性标本的OD值。选择OD值最大而蛋白量最少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1～10μg/ml。
3、酶标记抗体工作浓度的选择：首先用直◆接ELISA法进行初〓步效价的滴定（见酶标记抗体部份）。然后再固定其它条件或采取“方阵法”（包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度）在正式实验系统里准确】地滴定其工作浓度。
4、酶的底物及供氢体的选择：对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应，而本身无色∞。有些供氢体▲（如OPD等）有潜在的致癌作用，应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的●供氢体，如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后，应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时▼间，以10-30分钟为宜。底物使用〓液必须新鲜配制，尤其是H2O2在临用前加入。
实验规则：
1、要保证移液枪的准确性，误差不能超过2%。可用水和电子天平进行确定。但最好有专业人员进行矫正。
2、要配备20ul、50ul、100ul、1000ul和排枪各一支。吸取不同的液体后，要更换枪『头。即使是吸取◣标准品时。
3、要在实验前1小时将试剂盒从冰箱中取出，使各种试剂都恢复到室温，以使结果更稳定。
4、实验时，要使底物避光保▓存。
5、用枪吸取液体时速度不能太快，以免产生气泡而使吸取量不准确。
6、吸取液体时，要用量√程和需要量接近的枪去吸，减少误差。
7、将液体加到酶标孔ζ中时，避免枪头和孔内液体接触，可使枪头上的液滴和孔壁接触，液滴会自然流◤下去。
8、液体▅全部加完后，可将酶标板在桌子上平行轻轻★晃动30秒，混匀液体。也可以用酶标仪的晃动功能。
9、温浴时，要用不干胶或胶带纸封好酶标板，防╱止水分的蒸发。
10、洗板时，每次洗液加入▽后，应静置1分钟，使清∞洗更加彻底。没有洗板机时，倒去液体后，要将酶标板在报〗纸或毛纸上用力拍干。
11、洗液不够→时，可用蒸馏水㊣自行配制PH7.4，0.02M的磷酸缓冲液，加入0.1%的吐温20作为洗液。加入1/1000的叠氮钠后可长期保存。
12、底物△是光敏感的，要在临用前现配。
13、检测前，要打开酶标仪，使之稳定10分钟以上。
14、底物有一定的毒性，终◎止液对皮肤有腐蚀性，应尽量避免接触。
15、待⊙检样品要澄清，否则会影响结果。
16、温浴时间应遵守试剂盒规定。
17、应尽量做双孔实验，这∏样才能保证数据的准确性。
18、对结果有疑问的样品要用其它方法进行确证。
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