质粒小提试剂盒
Mini PlasmidKit
(目录号：HS0101)
产品包装
试剂盒成分
HS0101-1
50preps
HS0101-2
100preps
Buffer P1
15 ml
30 ml
Buffer P2
15 ml
30 ml
Buffer P3
20 ml
40 ml
RNase A (10 mg/ml)
150 ul
300 ul
Buffer PW
60 ml
60 ml
Buffer EB
10 ml
10 ml
Spin Columns PA
50个
100个
Collection Tubes (2 ml)
50个
100个
（注意：使∩用前将全部RNase A溶液加到BufferP1中混合均匀，2~8℃保存）
保存条件
本试剂盒在室温(15~25℃)干燥条件下，可保存12个月；更长时间的保存▓可置于2~8℃。若溶液产生卐沉淀，应在使用前置于37℃下溶解∑ 沉淀。单独包装的RNase A在室温可稳定保存12个月。加入RNase A后的Buffer P1应置于2~8℃保存，可稳定保存6个月。
产品简介
本试剂▼盒用于质粒DNA的小量制备与纯化。菌体经碱裂解〖、高盐、低pH处理，质粒可从菌体中释放出来，并特异、高效地被离心柱硅胶膜吸附。通过漂洗液PW的清洗可去除杂】质，在低盐、高pH条件下洗脱，最后得到纯度较高的质粒DNA。
使用本试剂盒可从1 ~ 5 ml过夜培养◣的菌液中纯化得到高达20ug的高纯度质粒DNA，在30 min之内完成提√取任务。所得质粒可直接用于酶切、转化、PCR、测序等各种常规分子生物学操作。
产品特点
1. 快速：步骤少，操作简便，节约时间。
2.简便：离心吸◤附柱不需要预平衡，漂洗液不需要另加乙醇，即开即用。
3. 高质：OD260/280在1.7 ~1.9之间。
4. 稳定：正确保存条件下一年内提取▆效果不发生变化。
操作步骤
1. 取1 ~ 5 ml过夜■培养的菌液，室温12,000 rpm离心1 min，尽量将上清去除干净。
（注意：根据菌液的浓度决定取液量，浓度高时ㄨ取1ml菌液离心即可，浓度低时可□ 多收集一次）
2. 加入250 ul Buffer P1，用枪头充分吹打使菌体重悬均匀。
（注意：是否将RNase A溶液加到BufferP1中并混合均匀；菌体沉淀是否悬浮▽充分，如有未彻底悬浮◎的菌块会影响裂解，导致提取的质粒浓度及纯度降低）
3. 加入250 ul Buffer P2，温和颠倒混↘匀6 ~ 8次，直到＠溶液变得清亮粘稠。
（注意：不可剧烈震荡，以免造成基因组DN**段的污染，所々用时间不要超过5min，以免质粒受到破坏，如未完全变得◥清亮，可能是菌体♀太多，可增加BufferP2的用量，在后续的操作中Buffer P3的用量也要相应增加）
4. 加入350 ul Buffer P3，立即温和颠≡倒混匀6 ~ 8次，可见白色沉淀物产生，室温静置2min，然后12,000 rpm离心3 ~ 5 min。
（注意：BufferP3加入后←应立即混合，避免产〇生局部沉淀，如果上清中还有微小白色沉淀，可再次◥离心后取上清）
5. 小心将上清液转移到离心吸附柱Spin Columns PA中，静置2min，让质粒DNA与吸附柱中的硅胶膜充分结合。12,000 rpm离心0.5 ~ 1 min，弃收集管中的废↓液。
6. 加入500 ul的Buffer PW，室温12,000 rpm离心0.5 ~ 1 min，弃收集管中废液。
（注意：漂洗液Buffer PW中有酒精，用后应立即盖紧瓶盖，以防酒精挥发）
7. 重复步骤6一次。
8. 室温12,000 rpm离心2 min，甩干残留』液体。
（注意：此步〗不能省略，否则残留乙醇会影★响质粒的后续使用）
9. 将离心吸附柱Spin Columns PA置于一个新的1.5 ml塑料离心管（自备）中，加入50 ~ 100ul的Buffer EB，室温放置2 min。12,000 rpm离心1 min，离心管∮底溶液即质粒DNA。
（注意：为增加洗脱效率，可将Buffer EB在50~60℃预热。如需使用去离子水洗脱，可用NaOH调整其pH值在7.0~ 8.5之间，为了增加质粒回收≡率，可将得到的溶液重新加入到】离心管中，室温放置2min，再次离心收集）
低拷贝或大质◥粒（>10 kb）提取
如果所提质粒为低拷贝质粒或大于10kb的大质粒，应加大菌体使用量，使用5 ~ 10 ml过夜培养物，同时按照比例增加P1、P2、P3的用量，洗脱缓冲液EB应在65~70℃水浴预热，在吸附≡和洗脱时可以适当的延长时间，以增加提取效率。其＠ 它步骤相同。
