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上海维景生物
IHC (免疫组化)
详细说明
免疫组化实验主要步骤
（预实验免费！常用抗ξ体免费！）
1. 洗载玻片
将载玻片置于重铬酸钾和浓H2SO4混合液中,目的是为了是载玻片上的硅胶等除去,同时使一些肉眼看不见的凹凸不平的表面变平整,便于组织吸附,然后置于清水中清洗,除去残余的重铬酸钾和浓H2SO4（大约冲一个小时左右）,再将载玻片浸泡于酒精之中ぷ, 然后放到架子上,置于37°C温箱中，将多聚赖氨酸涂布于玻片的表面，由于Lys带正电，而大多数的组织带负电荷，从而产生吸附作〗用。
2. 包埋组织:
先在铁模具中加入一些液态石蜡，先稍微冷却◣，然后再将待包埋的组织置于石蜡之中，并排列整齐，再将塑料模具盒盖上，最后加入少许液体石︻蜡，进行冷冻，使石蜡变成固态。
3. 切片
将包埋好的组织从模具上取下来，并置于石蜡切片机上，切片机通过调节上下∮左右来来使组织和切割方向一致，然后调节切片√的厚度，一般为5µm,如果比较难切，则可以适当调整厚度，用毛笔将切割的载玻片向外拉，并用小镊●子将包含有完整组织的载玻片置于40°C温水中。
4. 捞组织：
当组织︻载玻片置于40°C温水中之前，要先将水浴中的气泡赶走，以免气╳泡受热上浮而贴到组织上，组织受热展□ 开，最好是组织不起皱纹，用载玻片捞组织时，一般取载玻片的下1/3或者下1/2一般每种组织捞5-6张，其中2-3张是备用♀的，每张载玻片上通常捞两份▂组织，做对照使用，这样形成的误差就比较小了，而且捞载玻片的时候最好方向一致，以便观察，再将捞出来的载▲玻片置于架子上，放入37°C温箱中烘干。
5. 脱蜡
依次将载玻片放入二甲苯-二甲苯-100%酒精-100%酒精-95%酒精-90%酒精-80%酒精-70%酒精，起脱蜡作用的主要是二甲苯,依据的是相似相溶的原理.一般在每个↘试剂中放10min,天气热可以◥少放几分钟,相反,天气较冷的话,就要适当延长脱蜡时间,一般为12-15min。
6. 抗原修复
脱蜡㊣后在清水中冲洗一段时间，加入3%H2O2浸泡10min，从而除去内源性的过氧化氢酶，然后倒掉H2O2，在清水中洗两次，再加入柠檬酸缓冲液，放入微波炉中蒸煮3min（中火），一般刚到沸腾即可，冷←却至室温，然≡后再蒸煮一次，冷却至室温，蒸煮的目的是为了使抗原的位点暴露出来.
7. 血清封闭：
冷却至室温后，将柠檬酸缓冲液∮倒掉，水洗2次，并将载玻片置于PBS中5min，洗2次，擦干组〓织周围的PBS液，马上加上血清，使一些非特异性的位点封闭起来，然后放入37°C温箱中半小时∏。血清稀释10倍（900µlPBS：100µl血清封◢闭液）。
8. 加一抗：
将温箱中的载玻片取出，用吸水纸擦干载玻片反面和正面组织周围☆的血清，加一抗，如果做╳对照实验，就在对照的组织上加PBS。加完一抗后于4°C冰箱中保存过夜.
9. 加二抗:
将载玻片从冰箱中取出∩，放入PBS中洗3次，每次5min，擦干组织周围的↘PBS后♂加上二抗,然后置于37°C温箱中半小时。
10. 加SABC:
将片子从温箱中取出, 放入PBS中洗3次，每次5min，擦干组织周围的PBS后加上SABC, 然后置于37°C温箱中半小时。SABC稀释100倍（990µlPBS：10µlSABC）。
11. 加显色剂：
将片子从温箱中取出, 放入PBS中洗3次，每次5min，擦干组织周围的PBS后加上显色剂。（显色剂的▽配置：在1ml水中加1滴显色剂A，摇匀，然后加1滴显色剂B，摇匀，再加1滴显色剂C，摇匀） A：DAB B：H2O2 C：磷酸缓冲
12. 复染：
将显色后的片子用清水冲洗一段时间后，浸泡于苏木精↘中染色Ψ ，一般动物组织为半分钟，植物组织3-5min
13. 脱水：
将复染后的片子置于水中冲洗后，依次将载玻片放入70%酒精-80%酒精-90%酒精-95%酒精-100%酒精-100%酒精-二甲苯-二甲苯。每个试剂中●放置2min，最后浸泡在二甲苯中，搬到通风柜中。
14. 封片：
用中性树胶滴在组织旁边，再用盖玻片盖上，要先△放平一侧，然后轻〓轻放下另一侧，以免产生气泡，封好片子后置于通风柜中晾干。
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腺相关病毒 / 慢病毒的包装→服务、单多克隆抗体的★制备、 SCI文章的修改及发表服务等。
生物实验技术服务项目列表
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分子克隆技术服务：载体构建、定点突变、RT-PCR、荧光定量PCR、SNP分型等；
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