外泌体是包含了复杂RNA和〗蛋白质的小膜泡，是细胞间信『号传输的载体。多种细胞在正常及病理状态下均可分泌外泌体，它们广泛⌒ 存在于血液、唾液、尿液、脑脊↑液和乳汁等体液中，参与细胞间通讯。近年来，外泌体的研究热度持续攀升，在2019年自然科学基金获批项目中，外泌体研究相关项目的总数突破500个，立项的总金额突破2亿元。由于外泌体的尺寸很小仅为30~200 nm，目前很少有技术能够在单个外泌体水平同时提供物理表征和∮蛋白表型分析。单个外泌体表征分析是将免疫学与光学结合的一种新技术。该技术先利用√免疫识别将特定的外泌体进行捕获分离，然后再对目标外泌体的表面标志物及内容物（如携带♀的蛋白质、RNA、DNA及细胞因子）进行定量分析，从而更加全面地反映外泌↑体的特性。
作为外泌体表征分析的倡导者，美国NanoView Biosciences于2018年推出了全自动外泌体∮荧光检测分析系统ExoView，该系统一经推出，便引起了外泌体领域科研工作者的广泛关注，仅两年在全球已有100多个实验室采用该技术，发表文献近百篇，刊载在Cell, Cell Biology, Journal of Extracellular Vesicles等期刊。基于中国外泌体研究的快速发展，Quantum Design中国在北京建◥立了专业的客户服务中心，正式推出ExoView?外泌体全面表征试剂盒测试服务，只需要少量样品即可一次完成外泌体计数、粒径、蛋白表达、蛋白共定位■、亚群分布的分析。
ExoView?外泌体全面表征试剂盒可对细胞培ぷ养上清、血浆、血清、尿液、脑脊液、唾液等生物样本中的外泌体直接进行分析，仅需50 μl稀释样本。试剂盒的捕获抗体为anti-CD81, anti-CD9, anti-CD63, 同型 IgG 对照，也可自定义。此外，试╳剂盒的荧光抗体分为CD9（Blue）、CD81（Green）、CD63（Red）。
ExoView?外泌体全面表征试剂盒≡的优势包括：
? 特异性捕获：芯片上可包被多达6 种捕获抗体◣，特异性捕获含特定蛋白标记物的』外泌体。
? 绝对阳性外泌△体计数：芯片捕获外泌体后，可通过单粒子干涉反射成像传感器（SP-IRIS）技术直接检测样品中外︻泌体的数量。
? 单个外泌体蛋白共定位分析：检测每个外泌体的荧光信号＠ 并进行统计，可获得荧光共定∏位信息，用于分析样品中不同表型外泌体的比例。
? 无需纯化：使用抗体捕获模式，防止样品中杂质影响结果，可直接检测血液、尿液和细胞培养液中的外泌体，未纯化样品▽的测量结果与纯化后基本一致。
? 粒径分辨率高＠：高精度SP-IRIS技术，可检测≥50 nm的外泌体，测量结果与电子显微镜检测结果基本一致，并统计生成外泌体的粒径分布结果。
? 可检测外泌体内容物：试剂盒配套相应的穿膜剂，可穿透外泌体并对外泌体内容物进行染色并检测，如下图所示，Non-permeabilized时只能检测到跨膜蛋白CD9的荧光信号， Permeabilized后即可检测到外泌体内容物（如PD-L1、P-tau等）的表达。
检测流程：
试剂盒检测结果示例：
? 不同外泌体亚群数量统计
? 外泌体→粒径检测
? 荧光共定位分析
? 单个外泌体成像图
部分文献：
[1]. Characterization of extracellular vesicles and synthetic nanoparticles with four orthogonal single‐particle analysis platforms. Journal of Extracellular Vesicles. 2021
[2]. WJMSC‐derived small extracellular vesicle enhance T cell suppression through PD‐L1. Journal of Extracellular Vesicles. 2021
[3]. Isolation and characterization of extracellular vesicle subpopulations from tissues. Nature protocols. 2021
[4]. Targeting tumor-derived exosomes using a lectin affinity hemofiltration device. Cancer Research. 2021
[5]. Small RNA Sequencing across Diverse Biofluids Identifies Optimal Methods for exRNA Isolation. Cell. 2019
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