氧电极测定小麦胚呼吸活性

　　实验准备：

　　仪器器具：Oxytherm氧电极系统一套;剪刀，双面刀(或单面切刀或者手术刀)，1ml移液器，镊子，吸管，吸水纸，烧杯3个

　　试剂：测定介质50mmol/L pH7.5的Tris-HCl缓冲溶液。称取6.05克Tris(三羟甲基氨基甲烷) 800～900ml水中，滴加1mol/L HCl，调pH7.5，加水1000ml。除此之外，测定介质还可用磷酸、Hepes、Tricine等pH7.5 50mmol/L的缓冲液。

　　实验步骤：

　　1准备好所▽需的仪器和试剂，安装好氧电极，并与计算机连接，校正(详细操作步骤见厂家提供的说明书或汉语说明书)，校正结束后加入2mL缓冲液，开启转子，走基线(看基线是否稳定，测定前必须保证基线稳定)。

　　2均匀选取十个小麦种子，用手术刀切下胚

　　3将反应杯中的缓冲液吸出，重新加入2mL缓冲液，将切下的胚放入反应杯中，测定曲线如下：

　　4测定十分钟后，呼吸速率稳定下降，用软件计算曲线的斜率(呼吸速率)。假设曲线斜▂率为A。

　　5测定结束后，将样品吸出，清洗反应杯，重新加入小麦胚，重复步骤3

　　6小麦种子胚呼吸速率的计算：

　　呼吸速率Sr(umol O2/Per*s)=曲线斜率A(umol O2/ml*s)*2ml = A/300(umol O2/Per*s)

　　注：假设曲线斜率为A;Per表示每个胚

　　注意事项：

　　1首先参考氧电极使用注意事项

　　2测定胚活性时只需要切下胚，不需要测定整个种子，种子中只有胚有活性

　　3选取小麦＠ 种子要均一饱满，每次测定数量一致

　　可以完成该实验的仪器有：Oxygraph; Oxytherm; Chlorolab-2