大鼠淋巴细胞功能相关抗原3(LFA-3/CD58)ELISA试剂盒操作说明书

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　　大鼠淋巴细胞功能相关抗原3(LFA-3/CD58)ELISA试剂盒详细介绍：

　　中文名：大鼠淋巴细胞功能相关抗原3(LFA-3/CD58)ELISA试剂盒

　　别名：大鼠淋巴细胞功能相关抗原3(LFA-3/CD58)ELISA Kit

　　供应商：上海古朵

　　规格：规格：48t/96t

　　保存：2-8℃

　　有效期：6个月

　　用途：科研实验等领域科研研究，不得用于临床诊断。

　　特点：敏感性高、特异性强、重复性好、试剂稳定、易保存，操作简便。

　　检测种属：大小鼠、人、豚鼠、兔子、猪、犬、牛羊、鸡鸭ELISA试◥剂盒等种属。

　　ELISA方法被广泛应用于各种抗原和抗体测定。但ELISA测定中影◇响因素较多，而且其操作中有一定的技术要求，在检测过程中除正常反应外，有︻时常见到一些错误的结果。

　　引起ELISA测定错误结果的原因主要有：

　　①标本因素;

　　②试剂因素;

　　③操作因素。

　　大鼠淋巴细胞功能相关抗原3(LFA-3/CD58)ELISA检测试剂盒样本处理及要求：

　　1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集∩上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

　　2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收卐集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。

　　3. 尿液：用无菌管♂收集，离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

　　4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管▅收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

　　5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定①量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4)，用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。

　　6. 标本采集ω　后尽早进行提取，提取按相关文献进行∑，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本♂放于-20℃保存，但应避免反复冻融.

　　7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

　　大鼠淋巴细胞功能相关抗原3(LFA-3/CD58)ELISA检测试剂盒检测未知△抗原的双抗体夹心法：

　　1.　包被：用0.05M PH9.牰碳酸盐包被缓冲液▽将抗体稀释至蛋白○质含量为1～10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中㊣　加0.1ml，4℃过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。(简称洗涤，下同)。

　　2.　加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔)。

　　3.　加酶标抗体︾：于各反应孔中，加入新鲜稀释〓的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃孵育0.5～1小时，洗涤。

　　4.　加底物液显色〗：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分钟。

　　5.　终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。

　　6.　结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应々孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极¤浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测O·D值：在ELISA检测仪上，于450nm(若以ABTS显色，则410nm)处，以空白对照孔调零后测各孔O·D值，若大于◢规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。

　　大鼠淋巴细胞功能相关抗原3(LFA-3/CD58)ELISA检测试剂盒使用方法：

　　1.加样：分别设空■白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样时将样品加于酶标板底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。给酶标板覆膜，37℃孵育2小时。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品∞溶液。

　　2.弃去液体，甩干，每个孔中加入Detection Ab工作液 100μl(在使用前15分钟内配制)，酶标板加上覆膜，37℃温育1小时。

　　3.弃去孔内液体，甩干，洗板 3次，每次浸泡1-2分钟，大约350μl /每孔，甩干并№在吸水纸上轻拍将孔内液体拍干。

　　4.每孔加HRP Conjugate工作液(临用前15分钟内配制)100μl，加上覆膜，37℃温育1小时。

　　5.弃去孔内液体，甩干，洗板5次，方法同步骤3。

　　6.每孔加底物溶液100μl，酶标板加上覆膜37℃避光孵育15分钟左右(根据实际显况酌情缩短或延长，但不可超过30分钟。当标准孔出现明显梯度时，即可终止)。

　　7.每孔加》终止液50μl，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与→底物液的加入顺序相同。

　　8.立即用酶标仪在450nm波长测量各孔的光密度(OD值)。应提前打开酶标仪电源，预热仪器，设置好检测程序。

　　9.实验完毕后将未用完的试剂按规定的保存温度放回冰箱保存至有效期结束。