【基本原理】

　　重组DNA 分子需导入合适的宿主细胞(真核或原核细胞)才能进行复制，增殖和表达。用于分子克隆技术中的受体细胞为大肠杆菌K-12 的衍生菌(DH5α等)。细菌处于易于吸收外源DNA的状态叫感受态。用理化方法可诱导细菌进入感受态。本实验使用化学法※(CaCl2)处理处于生长对数期的DH5α细胞，使其对外源DNA的通透性增加，以达到外源DNA 分子导入细菌中的目的。

　　【器材】

　　1.高压灭菌锅

　　2.培养皿

　　3.恒温培养摇床

　　4.离心机

　　【试剂】

　　⒈ 细菌：DH5α

　　2.30 mmol/L CaCl2(灭菌)

　　3.LB培养基：配制每升培■养基，应在950 ml去离子水中加入：胰蛋白胨10 g、酵母提取物5 g、NaCl 10 g

　　摇动容器直至溶解，用5mol/L NaOH (约0.2ml )调节pH值至7.0，加入去离子水至总体积为1L，高压灭菌20min 。

　　4.LB 琼脂培养基：先按上述配方配制液体培养基，临高压灭菌前①加入琼脂 16～18 g。

　　【操作步骤】

　　1.将DH5α菌种在琼脂培养平板上画线，37℃培养12-16h。

　　2.从平板上ㄨ挑取1个单菌落，移入含2ml LB的试管中，在37℃条件下，以220rpm的速度振荡培养12-16h。

　　3.将2ml LB培养物转移到含50 ml LB培养基的三角瓶中，37℃培养2-3h，使其OD600值在0.3-0.6之间 (即细胞处于对数生长期)。

　　4.将培养♂物于冰上放置10min , 离心(3000-4000rpm, 4℃) 10min, 收集细菌。

　　5.弃上清, 在沉淀中加入10ml 预冷的30mmol/L CaCl2 悬浮细菌, 在冰上放置40-60min 。

　　6.离心(3000-4000rpm, 4℃) 10min , 回收细菌。

　　7.弃上清, 将细菌重新悬浮于2 ml 预冷的30mmol/L CaCl2溶液中。

　　8.感受态细菌于48h内使用, 或将已制备好的感受态细菌分装冻存(-70℃)。

　　上海创赛科技性能卓越，白介素细胞因子，胎牛血清，电泳设备科学仪器，原料药标准品，化学试剂，细胞培养耗材，上海创赛，海量产品特价促销中，欢迎来电咨询!