【基本原理】
从全血中制备白细胞DNA,可用水直接破裂血中红细胞和白细胞的细胞膜及核膜,释出血红蛋白、细胞核;再用KI 裂解细胞核并溶解DNA;最后用酚/氯仿除去蛋白质,加无水乙醇使DNA沉淀,经A260/A280检测DNA含量,再经琼脂糖电泳鉴定。
【器材】
1.离心机
2.紫外分光光度计
【试剂】
1.5mmol/L KI:8.3g KI加H2O到10ml
2.0.9% NaCl
3. 氯仿/异戊醇(24:1)
【操作步骤】
1.取200μl抗凝血,加入1ml 水。
2.8000rpm离心5min,弃上清。
3.沉淀中加入40μl 5mol /L KI,旋涡振荡30Sec。
4.加入200μl 0.9% NaCl,然后再加入300μl氯仿/异戊醇,振荡30Sec。
5.10 000rpm离心5min。
6.小心吸取上清液,加︾入冷无水乙醇1ml。
7.10 000rpm离心5min,弃无水乙∮醇。
8.DNA 样品自然干燥。
9.加适量的H2O或TE溶解DNA。
10.核酸定量测定和电泳鉴定。
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