【基本原理】
一个混合蛋白质样品经过聚丙烯酰胺①凝胶电泳以后，各组分由于电泳迁移率不同而被分离。这种差异就蛋白质分子本身而言主要与分子量以及╱所带净电荷和形状有关。当电泳体系中含有一定︽浓度的SDS时，电泳迁移率的大小∞仅取决于蛋白质的分子量(其它影响因素可忽略不计)，从而可直接由电泳迁移率推算出蛋白质的分子量。
SDS(十二烷∏基硫酸钠)是一种阴离子去污剂，能够与蛋白质结合，破坏蛋白质分子内部、分子之间以及与其它物质分子之间的非共价键, 使蛋白物变性而改变原有的空间构象。当有强还原剂(如巯基乙◥醇)存在使蛋白质分子内的二硫键被彻底还原，并且SDS 的总量为蛋白质量的3～10 倍、SDS 单位浓度大于1mol/L 时。这两者的结合是定量的，大约每克≡蛋白质可结合1.4克SDS。蛋白质分子一经结合了一定量的SDS阴离子，所带负电荷的↘量远远超过了它原有电荷量。从而消除了不同种类蛋白质间电荷的差异，且由于分子量越大的蛋白质结合的SDS越多、带负电荷也越多,这就使各蛋白质-SDS复合物的电荷密度趋于一致》;同时，不同蛋白质的№SDS 复合物形状也相似，均是长椭圆状。因此，在电泳过程中，迁移率就取决于蛋白质-SDS 复合物的卐大小№，也可以说是取决于蛋白质分子量的大小。
据经验得知▅，当蛋白质的分子量在17 000-165 000之间时。蛋白质-SDS复合物的电泳迁移率与蛋白质分子量的对数呈线性关系：
lgMW=lgK-bm
式中MW 为蛋白质的分子量，m 为相对迁╱移率，K 为常数，b 为斜率。将已知分子量的标准蛋白质在SDS -聚丙烯酰胺凝胶中的电泳迁移率对分子量的对数作图，即可得到一条标准曲线。只要测得未知分子♂量的蛋白质在相同条件⌒下的电泳迁移率，就能根据标准曲线求得其分子量。
【器材】
1.电泳仪
2.垂直板电泳槽
3.微量进ζ 样器
4.乳头吸管
5.50ml小烧杯
【试剂】
1.贮备液的配制
(1)30%丙烯酰胺溶液：丙烯酰胺29.2g，甲叉双丙烯酰胺0.8g，加水至100ml，棕色瓶4℃保存。
(2)1.5mmol/LTris-Cl分离胶缓冲液，pH8.8(4×)：称取18.15g Tris，用1NHCl调pH至8.8，加水至100ml，4℃保存。
(3)1.0mmol/L Tris-Cl浓缩』胶缓冲液，pH6.8(4×)：称取5.98g Tris，用1NHCl调pH至6.8，加水至100ml，4℃保存。
(4)电极缓冲液(pH8.3)：取14.40g甘氨酸，3.00g Tris，加10ml 10%SDS，加水至1L，4℃保存。
(5)10% SDS：取10g SDS，加水至100ml ，完全溶解后室温保存。
(6)10%过硫酸铵溶液(AP)：临用前现配，或配好后-20℃分装冻存。
(7)染色液(0.25%考马斯亮〓蓝R-250、50%甲醇、7%乙酸)：考马斯亮⊙蓝R-250 2.5g，甲醇500ml、70ml 冰乙酸，加水至总体积1000ml(甲醇可︽用无水乙醇代替)。
(8)脱色液(30%甲醇、7%乙酸)：甲醇300ml，冰乙酸70ml，加水至1000ml(也可用无水乙醇代替甲醇)。
(9)样品缓冲液(2×)：H2O 2.4ml，浓缩∑ 胶缓冲液1.0ml、甘油0.8ml、10% SDS
3.2ml，2-硫基乙醇0.4ml。0.025%(W/V)溴酚兰0.2ml。
(10)TEMED
2.工作液的配制
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