根据应用目的不同,离心机有分析用和制备用两种。分析用超速离心机仅能对小样品(小于1ml)进行分析(如分子量的测量);制备用离心机是为提取、纯化大分子组分设计的,可对10~2000ml的样品进行分离。
制备用离心机是应用最广泛的离心机,根据其性能可分为低速离心机(最大速度不超过10,000rpm)、高速离心机(High-speed centrifuge,最大转速20,000-25,000rpm)和超速离心机(Ultracentrifuge,最大离心力可〓超过5000,000×g,即75,000rpm,r=8cm)。有的低速离心机的离心室有冷却装置;高速离心机都有冷却装置,以防止转轴的温度过高和∩保护生物样品;所有超速离心机都有真空装置,以减少离心室内空气和转头的摩擦作用。高速和超速离心机的转头都标有最大转速,离心时绝对不得超过这一限度,否则会引◣起转头破裂,仪器损坏和人身伤亡。
沉降速度离心
沉降速度离心(Velosity Sedimentation Centrifugation)是指在离心管内液体密度均一情况下进行的离心。最常见的方法是差速离心(Differential Centrifugation),差速离心是对含两种以上大小不同的待分离物质的混合液,以不同离心速度分步骤离心沉淀,使之互相分离的离心方法。例如用差速离心法进行亚细胞结构成分的分离(表4-1)。
从表4-1可知,如果以4,000×g离心15分钟,未打破的真核细胞、细胞碎片和细胞
可以沉淀下来;将此上清液卐再以15,000×g离心20分钟可将线粒体沉淀出来。如将去除线粒体的上清液再以30,000×g离心30分钟,溶酶体便被沉淀下来。如将去除溶酶体的上清液再以100,000×g离心3小时,核糖体和多聚核糖体可被沉淀下来。由此可知,对于沉淀不同的亚细胞组分,相对离心力和离心时间这两个因素是不可忽视的。如果根据离心条件的不同,需要改变离心力或离心时间(必须是同一大小的转头)应根据下述公式进行计算方可达到相同∏的分离目的。
rpm2规定·t规定=rpm2新选·t新选
rpm为每分钟转速,t为时间。
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