步骤：

　　1. 前一天下午做好所需数量的Feeder细胞板;

　　2. 提前半小时左右将培养基从4℃冰箱取出，放于室温(或者放于37℃温箱内);

　　3. 将ES细胞培养皿、Feeder细胞培养皿从培养箱内取出(相差显微镜下作常规观察，Feeder细胞应生长良好，细胞覆盖95%左右，至少90%以上的培养皿面积);ES细胞应生长良好，接近长满培养皿，细胞集落大小一致、疏密均匀，集落形状规则、呈椭圆形、边缘光滑、表面光滑，细胞生长致密、核大、胞质少;上海创赛科技提供6.0CM一次性细胞培▂养皿，平底灭菌，适合细胞贴壁生长 ,商品编号：C81-TCD010060-600个/箱，价格652.5元。

　　4. 将ES细胞培养皿内的液体吸出、弃去，用PBS 1 mL左右洗一遍，加入胰蛋白酶溶液，作用约30秒，小心吸出胰蛋白酶溶液，弃去;再作用1—5分钟，不时观察，待细胞层(皿底一层白色脏东西样膜)出现裂缝并明显开始下滑时，补加培养基，适度吹打(视消化程度及管口粗细而定，至看不到明＠ 显的大的细胞团块为止);平均分到Feeder培养皿中(滴加，以免将Feeder细胞吹脱落下来)，滴加补加培养基至5 ml左右(滴加，以免将Feeder细胞吹脱落下来;若为3.5cm培养皿，则补加至3ml左右)，作好标签;上海创赛科技提供E30-LW300LT生物显微镜 ,商品编号：E30-LW300LT生物显微镜，询价。

　　5. 前后左右水平晃动培养皿，使ES细胞均匀分布于培养皿中，放入培养箱继续培养。

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