磷脂酰丝氨酸(Phosphatidylserine, PS)正常位于细胞膜】的内侧，但在细胞凋亡的早期，PS可从细胞膜的内侧翻转到细№胞膜的表面，暴露在细胞外环境中。Annexin-V是一种分子量为35~36KD的Ca2 依赖性磷脂结合蛋白，能与PS高亲≡和力特异性结合。将Annexin-V进行荧光素(FITC、PE)或biotin标记，以标记了的Annexin-V作为荧光探针，利用〖流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡的发生。上海创赛科技提供BD抗体550589，PE Goat Anti-Mouse Ig ,商品编号：BD-550589-0.2 mg，询价。
碘化丙啶(propidine iodide, PI)是一种核酸染料，它不能透∩过完整的细胞膜，但在凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI能够透过细胞膜而使细∩胞核红染。因此将Annexin-V与PI匹配使用，就可以将凋亡早♂晚期的细胞以及死细胞区分开来。上海创赛科技提供碘化丙啶，Propidium Iodide ,商品编号：B11000383-10mg，价格172.2元。
方法
1 悬浮细胞的染色：
①将正常培养和诱导凋亡▅的悬浮细胞(0.5~1×106)用PBS洗2次;
②加入100ul Binding Buffer和FITC标记的Annexin-V(20ug/ml)10ul;
③室温避光30min，再加入PI(50ug/ml)5ul，避光反应5min后，加入400ul Binding Buffer;
④立即用FACScan进★行流式细胞术定量检测(一般不超过1h)， 同时以不⊙加AnnexinV-FITC及PI的一管作为阴性对照。上海创赛科技提供异硫氰酸荧光素,FITC，3326-32-7 ,商品编号：B11000218-50mg，价格172.2元。
2 贴壁培养的细胞染色：
先用0.25%的胰酶消化，洗涤、染色和分析同悬浮细胞。
3 爬片细①胞染色：
同上，最〓后用荧光显微镜和共聚焦激光扫描显微镜进行观察。
注意事项
1. 整个操作动作要尽量轻柔，勿用力吹打细胞。
2. 操作时注意避光，反应完毕后尽快在一小时内检测。
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