经验结论

　　1、如果PCR产物很短，200bp以内，那么用SYBR做Q-PCR没有问题的话，可以用。

　　2、如果PCR产物比较长，那最好重新设计引物。

　　3、如果用TaqMan做Q-PCR，那很可能需要重新设计引物。这个一般产物都在100bp左右，太大了酶的外切效率太差。上海创赛科技提供0.5ml单管PCR管，平盖，无DNA，RNA酶，商品编号：C81-PCR000500-1000只/包，价格248元。

　　4、如果RT-PCR引物的效率不好，SYBR会降低一点PCR效率，那会导致PCR无法扩增。也只能重新设计引物。上海创赛科技提供163795-75-3，SYBR Green1，荧光染料，BR ，商品编号：D23-RS1151-100微升，价格416元。

　　原因

　　1. 产物越短，相对而言，PCR效率越高。

　　而qPCR如果要Relative Quantification的话，使用ddCT方法的假设是100%PCR的效率。因此产物越长越偏离这个假设。定量越不准确。特别是当跟内参做比较，而内参的扩增效率不同。这样就产生两条不同的回归线。而这两条线由于效率不同而相交。导致在交点上下的时候定量相对关系发生改ぷ变，引起明显的定量误差。这个还是要小心的。即使绝对定量，PCR效率越高，反应就越敏感，曲线的动态范围更大。也就是说可以定量的范围更广。因此一般不超过200bp。当然也确实有人做比较大的产物，但是一般不会这么推荐。

　　2. qPCR的目的是获得荧光数据，而不＠ 是获得PCR产物。

　　所以一般都以尽快完成PCR周期为目标。自然要尽量缩短每个周期的时间。如果产物太长自然要更多的延长时间。对qPCR来说实在没有必要。

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