兰花花叶病毒(CMV)酶联免疫分析试剂盒使用说←明书本试剂盒仅供研究使用。96T使用目的： 本试剂盒用于测定植物组织，细胞及〇相关样本中兰花花叶病毒(CMV)水平。实验原理 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中兰花花叶病毒(CMV)表达。用纯化的兰花花叶病毒(CMV)抗体包被微孔板，制成固相抗体，可与样品中兰花花叶病毒(CMV)相结合，经洗涤除 去未结合的抗原和其他成分后再与 HRP 标记的兰花花叶病毒(CMV)抗体结合，形成抗体-抗 原-酶标抗体复合物，经过︻彻底洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝∮ 色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD 值）， 与 CUTOFF 值相比较，从而判定标本中兰花花叶病毒〇(CMV)的存在与ㄨ否。试剂盒组成标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进→行实验。若不能 马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复▂冻融2．不能检←测含 NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。操作步骤1. 编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照 2 孔、阳性对照 2 孔、空白对照 1孔（空白对照孔▲不加样品及酶标试剂，其余各⊙步操作相同）2. 加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照 50μl。然后在待测样品孔先 加样品╱稀释液 40μl，然后再『加待测样品 10μl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不 触及孔壁，轻轻晃动混匀，3. 温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。4. 配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此 重复 5 次，拍干。6. 加酶：每孔加入酶标试剂▓ 50μl，空白孔除＠ 外。7. 温育：操作同 3。8. 洗涤：操作同 5。9. 显色：每孔先加入显色剂 A50μl，再加入显色剂 B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10 分钟.10. 终止：每孔加终止∮液 50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在◆加终止 液后 15 分钟以内进行。计算和结果判定：试验有效性：阳性对照孔∮平均值≥1.00; 阴性对照平均值≤0.10临界值（CUT OFF）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15阴性判定：样品 OD 值< 临界值（CUT OFF）者为兰花花叶病毒(CMV)阴性 阳性判定：样品 OD 值≥ 临界值（CUT OFF）者为兰花花叶病毒(CMV)阳性。注意事项1．操作严◥格按照说明书进行，本试剂不同批号组分不得混用。2．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未 用完，板条应装入密封袋中保存。3．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤╳时不影响结果。4． 封板膜只限一次性使▃用，以避免交叉污染。5．底物↓请避光保存。6．试验结果判定必须以酶标仪读数为准，使用双波长检测时，参考波长为 630nm7．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为 2M 的硫酸，使用时必々须 注意安全。保存条件及有效期1．试剂盒保存：；2-8℃。2．有效期：6 个月