本试◇剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断牛乳铁蛋白（LTF）ELISA检测试剂盒使用说明书检测原理试剂盒采用双抗体一步夹心√法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被牛乳铁蛋白（LTF）捕获抗体的包被微㊣　孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检※测抗体，经卐过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成↓最终的黄色。颜色的深浅和样品中的牛乳铁蛋白（LTF）呈正相关。用酶标仪∩在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。样品收集、处理及保存方法1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液▅后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上⊙清。3. 细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。4. 组织匀浆：将☉组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。5. 保存：如果样本收①集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。自备物品1. 酶标仪（450nm）2. 高精度加样器及枪Ψ头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3. 37℃恒温箱操作注意事项1. 试∴剂盒保存在→2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于♀正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。3. 预处理后的样本▓无需稀释，直接取50μL加样即可。4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操※作。5. 所有液体组分使用前充分摇匀。试剂盒组成名称 96孔配置 48孔配置 备注微孔酶标板 12孔×8条 12孔×4条 无标准品（6管） 0.5ml/管 0.5mL/管 无样本稀∩释液 6mL 3mL 无检测抗体-HRP 10mL 5mL 无20×洗涤缓︾冲液 25mL 15mL 按说明书进行稀释底物A 6mL 3mL 无底物B 6mL 3mL 无终止液 6mL 3mL 无封板膜 2张 2张 无说明书 1份 1份 无自封袋 1个 1个 无注：1、标准品浓度依次为：400、200、100、50、25、12.5 μg/mL.2、在样本值超过标准品最高浓度的【情况下，可用样本稀释液适当稀释样本。试剂的准备 20×洗涤缓☆冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓∑　冲液加19份的蒸¤馏水。洗板方法1. 手工洗板：甩尽○孔内液体，每孔加满洗涤□　液，静置1min后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍ζ干，如此洗板5次。2. 自动洗板机：每孔◤注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。操作步骤1. 从室温平衡20min后的铝箔■袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。2. 设置〖标准品孔、样本孔和空白孔，空白孔什么都不ω　加；标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；3. 待测样ω本孔各加待测样本50μL；4. 随后标准品孔和样本孔中（空白孔不加）加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温①育60min。5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗【板机洗板）。6. 所有孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。7. 所有孔加入终止→液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。结果判断 绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标」准品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计↑算各样本浓度值。 试剂盒性能1. 准确性：标准品线性回归与】预期浓度相关系数R值，大于等于0.9900。2. 灵敏度：最低检测浓度小于1.0μg/mL。3. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。4. 重复性：板内、板间变异系数均小于15%。5. 贮藏：2-8℃，避光▆防潮保存。6. 有效期：6个月免责声明1. 试剂『盒仅供研究使用，不得用于临床实验或人体实验，否则所产生的一切后果，由实验者承△担，本公司概不负责。2. 严格按照说明书操作，实∑　验者违反说明书操作，后果由实验者↑承担。