Elisa试剂盒有着准确性高、灵敏度高、特异性强的诸多优点，深受广大用户朋友的喜爱。然而，在实验过程中，也需要注意很多问题。对此，古朵生物提醒广大用户，需要遵守一些规则，才能更好地进行实验，取得较好的实验成果。
Elisa方法被广泛应用于各种抗原和抗体测定。在Elisa测定中影响因素较多，在检测过程中除正常反应外，有时常见到一些错误的结果。引起ELISA测定错误结果的原因︾主要有：标本因素;试剂因素;操作因素。
冬歌生物提示广大用户，在进行实验的过程中，需要注意以下的一些问题。
1.样品稀释
一般产品的样品稀释倍数均通过大量试验确定，以保证试验卐的灵敏度和特异性。酶联ξ免疫反应是一种敏感性很高的反应，如果血清不稀释，不可避免会产生很强的非特异性反应，出现假阳性。
2.试剂盒平衡
Elisa中所有试剂和板条均应在试验前平衡至室温(约25℃)，一般需在室温放置20～30分钟以上。平衡时间太短会造成试剂混匀不够，样品孵育时间相对缩短，ELISA反应不◤够充分。冬季室温低，可将试剂盒置37℃温箱20分钟。
3.样品和试剂的混匀
在稀释前、后的样品必须充分混匀，所有试剂在加样前也须摇匀，以保证试验的均一性。
4.加样
加样是一项很重要的步骤。加样不可◥太快，要避免加在孔壁上部，不可溅出和产生气泡。加样太快，无法保证微量加样的准确性和均一性。加在孔壁上部的非包被区，易导致非特异吸附。
5.温育
温育是ELISA测定中影响↘测定成败最为关键的一个因素。ELISA作为一种固相免疫测定，抗原抗体的结合反应在固相上进行，要使液相中的抗原或抗体与固相上的特异抗体或抗原完全结合，必须在一定的温度条件下反应一定的时间。
6.洗板
固相免疫测定技术是一种非均相免疫测定技术，需以洗涤操作将特异结合于固相的抗原或抗体与反应温【育过程中吸附的非特异》成份分离开来，以保证ELISA测定的特异性。洗液尽量不要溢出孔外;加洗液后要静置1分钟，甩去板孔中洗液后，一定要大力拍干;及时更换吸水纸，尤其是拍过酶标记物的吸水纸一定⊙要弃去，否则可能影响试验结果。
7.显色
显色一定要控↓制时间,根据试剂盒说明操作即可。一般来说，显色时间过短，结果偏低;显色时间过长，空白增高或者非特异性显色增加。
8.比色
比色要注意波长的选择。以TMB为底〖物和以OPD为底物的试剂盒均有使ζ用，而前者比色波长为450nm，后者为492nm，滤光片需根据要求随时更换。因此，容易出现滤光片错用的问题。
