异常凝血酶原(APT）elisa样本测定本试剂仅供研究使用 目的：本试剂盒用于测定人血清，细胞上清及相关液体样本中异常凝血酶原(APT)的含量。实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人异常凝血酶原(APT)水平。用纯化的人异常凝血酶原(APT)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入异常凝血酶原(APT)，再与HRP 标记的异常凝血酶原(APT)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下◇转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的异常凝血酶原(APT)呈正相关。用酶标◇仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中人异常凝血酶原(APT)含量。试剂盒组成：试剂盒组成 48 孔配置 96 孔配置 保存说明书 1 份 1 份封板膜 2 片（48） 2 片（96）密封袋 1 个 1 个▓酶标包被板 1×48 1×96 2-8℃保存标准品：36ng/ml 0.5ml×1 瓶 0.5ml×1 瓶 2-8℃保存标准品稀释液 1.5ml×1 瓶 1.5ml×1 瓶 2-8℃保存酶卐标试剂 3 ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 2-8℃保存样品稀释液 3 ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 2-8℃保存显色剂A 液 3 ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 2-8℃保存显色剂B 液 3 ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 2-8℃保存终止液 3ml×1 瓶 6ml×1 瓶 2-8℃保存浓缩洗涤液 （20ml×20 倍）×1 瓶 （20ml×30 倍）×1 瓶 2-8℃保※存样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固10-20 分钟，离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集▅上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。2. 血浆：应根据标本的要▅求选择EDTA 或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20 分钟后，离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有♀沉淀形成，应该再次离心。3. 尿液：用无菌管收集⊙，离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照∞实行。4. 细胞培养上清：检测分泌性的①成份时，用无菌管收集。离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100 万/ml 左右。通过ω　反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。25. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融Ψ化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或○匀浆器将标本匀浆充分。离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。6. 标本采集后尽早进行提︽取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实︾验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融〗.7. 不能检测含NaN3 的样品，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。操作步骤1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设¤标准品孔10 孔，在第一、第二孔中分别加标准品100μl，然后在第¤一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100μl 分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl 弃掉，再各取50μl 分别加◤到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从■第五、第六孔中各取50μl 分别↓加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl 加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九ㄨ第十孔中各取50μl 弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为24ng/ml，16ng/ml，8ng/ml，4ng/ml，2ng/ml）。2. 加样：分别设空白孔（空白对№照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待№测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5 倍）。加样将样品加于酶标板★孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。4. 配液：将30（48T 的20 倍）倍浓缩洗涤液用蒸→馏水30（48T 的20 倍）倍稀释后备用。5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此重复5 次，拍干。6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔↑除外。7. 温育：操作同3。8. 洗涤：操作同5。9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色↑剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15 分钟.10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄】色）。11. 测定：以空白⌒空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止液后15 分钟以」内进行。注意事项：1． 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30 分钟后方『可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2． 浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤∑　时不影响结果。3． 各步加样◥均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时♀间最好控制在5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4． 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD 值大于标准品孔第一孔的OD 值），请先□用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6． 底物请避光保存。37． 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标ㄨ仪读数为准.8． 所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9． 本试剂不同批号组分不得混用。10. 如∮与英文说明书有异，以英文♀说明书为准。