成像设备是生物实验室最为常用的仪器之一,直接为您的论文提供影像依据。而这些影像质量的█好坏,有时候甚至决定着您的论文能否发表。拥有一台好的、运行稳定的设备也是导师和技术主管的心愿。那么,如何从纷繁的市场上选择到一款好的成像设备呢?很多号称“王牌”的设」备是否真的能够打满分呢?本文教您选择成像系统的三大要要点:
要点一:实践出真知,试用才知道
每个成像设备厂家都对自己的产品是“王婆卖瓜,自卖自夸”,经常〒给您上两个小时课中间还不用休息,什么“专利技术”、“人性化设计”、“生命科学产业︻大奖”。只有您想不到的,没有他做不到的,可是,这些东西对用户到底有什么意义?就没有几个√人说得清了!好用才是硬道理!任凭你说得天花乱坠,拿来我试试,不就什么□ 都清楚了!现在多数』厂商都提供Demo机服务,还有技术人员现场答疑解惑,那卐就请各位上场,真刀真枪的拼一下,谁◢的性能好,价格优,那我就要谁的!
当然,我们的实际测试结果仅仅是针对我们自己的样品和现场demo的机器而已。我★们不能据此对相关品牌和相关型号做太多评判。由于具体应用的限制、操作技巧的差●异以及可能的仪器状态的区别,我们有可能没有给出公允的评价。但无论如何,这些讯息对我们采购者和使用者来说都是非常重要的。
要点二:只选ξ符合自己实验室要求的设备
市场上各品牌、各型号的成像设备林林种种,从成像原理上可以分成两大类,分别是拍照成像和扫〓描成像。拍照成像简单说就是样品和相机的相对位置不动,可以进行单次∏成像或多次成像;而扫描成像则是相机对样品进行局部成像,然后通过样品或相机的移动对整个样品进行成像。拍照成像目前主要采用CCD相机成像,由于可以设置不同的曝光时间,常被用来进行微弱的化≡学发光及生物发光的成像。而扫描成像则由于精度高、重复性好被广泛用于大型样品以及多通道成像中♀。可以说,对于大型样品或多通道应用,能选择扫描成像的,尽量不要选择拍照成像!原理搞清Ψ楚了,选择起〇来就简单了!不同的原理导致了不同应用的最佳选择,所以千万不要相信什么“全能王”之类的话,没有任何一款机器可以▓通吃所有应用领域。
下面就实验室▲最常见的一些应用简单的说明选择的依据:
蛋白电泳凝胶:一般此类凝胶采用考染或银染,白光透↘射成像。对于小型凝胶您可以选择一般的凝胶成像设备,但是对于大型凝胶,特别是▼双向电泳凝胶,由于CCD拍照成●像会有几何扭曲,而且透镜效应也会导致不同区域的信号强度差异〓,另外CCD拍照也无法保≡证不同凝胶的成像参数保持一致∑,因此扫描成像是最好选择。
核酸电泳凝胶:一般此类凝胶都采用EB染色、紫外激发,而且凝胶较@小。推荐采用一般的凝胶成像设备即可完成。
转印膜:一般转印膜有比色法显色、同位素、化学发光和荧光等ζ 不同检测手段。比色法显色就是产生有颜色的条〒带或斑点,一般采用普通的凝胶成像设备即可;同位素可以采用压胶片曝光的方法,但是费时、费力而且容易【过饱和,比较通用的方法是由FujiFilm在1981年发明的磷屏成像技术,获得信号潜影的磷屏通过激光扫描就可以获取同位素的信号。而化学发光是目前最常用的蛋白印迹的检测ξ 手段,无疑,冷CCD拍照成像对这种微弱的光信号是最合适的。荧光是所有这些检测手段中最令人赞叹的◇和最有前景的!这不仅仅是因为荧光染料具有最№宽的动态范围,而且还在于它能够为我们提供多通路的检测途径。当然,您可以使用单一荧光检测,这时您对凝胶成像♀设备的要求就包括了新的激光光源和相应的滤光片。如果您是一个完美主义者,或者您需要对邻近或重叠的目╳标分子进行◇成像,那么多通道荧光检测是您的不二之选!这时扫描成像绝对是最佳选择,这样选择不仅仅是因为扫描成像能够带来更高的灵∞敏度和分辨率,更重要的是,不同通道之间没有几何扭曲,拟合性好。
微孔板及其他特殊需求:对于拍照成∩像而言,由于几︼何扭曲的问题,对微孔板成像就变得比较复杂了,一般必须一个专用的校正装置∩才可完成。当然,如果采用扫描成像一般不需要任何额外附件。很多实验室现在都对小动物成像非常感兴趣,然而对小动物进行真的不是一件简单的事,一方面小动物需要进行麻醉和固定;另一方面还需要对信号位置进行三维定位。因此,能同时提供功》能、代谢和解剖图像的PET/CT是进行这类成像的最有力的工具。限于篇幅,这部分将不做更多介绍。
要点三 参数Ψ 细节很重要
当我们在考察仪器Demo的情况后还是无法分辨其性能之优劣时,除了可以了解兄弟科室的使用情况和评价,就只能推开仪器看参数了。当然※看参数是有窍门的。很多成像仪的参数写了几十条,其实最关键的就那么几条。我们对比不同厂商的参数时一定要注意只比关键▅的,而对那些无关痛痒的参数则大可以视而不见!另外,千万不要被厂商自己给相应产品的评分所①欺骗,他的那套〓评分系统仅仅是相对自己的产品而言,即使给出了最高分“5”分的优秀指标,和其他厂商产品的性能相比,可能还是属╱于垃圾级的!
对于扫描成像而言,灵敏→度一般不是问题,我们最关注的应该是分辨率,当然分辨率只要达到我们的要求即可,对于小型的凝胶、膜和微孔板来说,一般分辨率在25um左右应该是足∑ 够了!在满足分辨率后,一个更重要的参数摆在我们的面前,那就是动态范围,简单的说,动态范围决定着你能否同△时在一张胶上同时看到强→的信号和弱的信号,而且他们之间保持比较好的定量关系!一般动※态范围采用数量级来表示,这个数越大,表明动态范围越宽!
对于激光扫描成像系统,情况就复杂一些。从激光器、滤光片到分光镜和检测器还有好多需要『考虑和比较的。同样限于篇幅,以后在做详细介绍。
下面主要介绍实验室最常用的凝聚成像仪的●参数选择。根据原Ψ则一,如果您主要用它来拍普通核酸胶或蛋白胶,那么几乎市场上所有的成像仪都可以很好的满足您的需求,这时除了价格这个决定因素外,能比较的也就是一些诸如“操作是否简便、外形是否时尚”等︽无关痛痒的指标了!真正需要花心思考察的可能就是准备做化学发光的用户,他们对敏感度要求高,同ζ 时还要求比较宽的动态范围。
要想捕获到微弱的化学发光,需要上佳的CCD相机和镜头。一般来说,CCD相机的冷却温度和背景噪音息息相关,温度越低,噪音就越∏低。因此,-25℃的绝对制冷温度是对相机的第一个要求(更低的◤温度,噪音降低效果不明显,而量子效率又会受很¤大影响);另外,较大的像素能够提供更高的捕光效率;所以对于相同大小的CCD芯片,需要注意像素的尺寸。镜头的参数就简○单了,由于我们只需要观察近距离的样品而且一般可以调整样品位置(有些厂家甚至提供电动样品升降平台),所以基本无需选择长镜头♀或者变焦镜头;但是,由于我们需要检测微弱◣的化学发光,镜头的光圈则至关重要,一般F值越小,其通光ω量越大,而且成平方反比关系,因此我们一般需要【选择光圈F值尽量小的镜头。另外,如果镜头是电动的,我们可以省却打开机箱,反复手工调整光圈和聚焦等的烦恼。
其他我们需↓要考虑的包括光源、滤光片和暗箱等部件。光源的种类和发光的均一度①,滤光片的数量和暗箱的↘遮光效果等均在我们的ω考虑范围之内。当然,一般如果成像仪的CCD和镜头配置不错,一般这些部件也不会太差。