猪血管生成素1(ANG-1)elisa试剂盒使用说明书Elisa kit规格：48孔配置/96孔配「置标准品稀释液：1.5ml×1瓶酶标试剂：3 ml×1瓶（48）/6 ml×1瓶（96）【猪血管生成素1(ANG-1) elisa试剂盒】本试剂仅供研究使用 计算：以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐〖标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样ω　品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再』乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值◤计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值〗代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。试剂盒组成：封板膜:2片（48）/2片（96） 说明书:1份 密封袋:1个标准品： 2700ng/L 0.5ml×1瓶 0.5ml×1瓶 2-8℃保存 酶标包○被板: 1×48 1×96 2-8℃保存样品稀释液: 3ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存显色♂剂A液: 3ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存显色剂B液: 3ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保□存终止液: 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存浓缩洗涤液:（20ml×20倍）×1瓶 （20ml×30倍）×1瓶 2-8℃保△存实验原理：本︾试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中猪血管生成素1(ANG-1) 水平。用纯化的猪血管生成素1(ANG-1) 抗体包被微孔板，制成固相①抗体，往包被单抗的微孔中依次加入血管生成素1(ANG-1) ，再与HRP标记的血管生▂成素1(ANG-1) 抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复」合物，经过彻底洗涤后□　加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜¤色的深浅和样品中的血管生成素1(ANG-1) 呈正相关。用酶标仪在450nm波长下】测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中猪血管生成素1(ANG-1) 浓度。目的：本试剂盒用于测→定猪血清，血浆及相关液∩体样本中血管生成素1(ANG-1) 的含量。服务承诺：?供货期：款到发货。工作时间内免费的技术▆咨询和指导?。请来电咨询为客户提供来样检测服务，最大限度实验结果的有效性(免费代测)。保存条件及有效期：试剂↓盒保存：2-8℃| 有效期：6个月 【猪血管生成素1(ANG-1) elisa试剂盒】样本处◥理及要求：1. 血清：室温血△液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收▲集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次▼离心。2. 血浆：应根据标ㄨ本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收ㄨ集上清，保存过程№中如有沉淀形成，应该再次离心『。3. 尿液：用无菌管收集◣︻，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集∮上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份⌒　时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清█。检测细胞内的成份【时▓，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融→，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。5. 组织标本：切割标√本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备¤用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后●一份待检测，其余冷冻备用。6. 标本采集后尽早∮进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进♀行试验，可将标本放于-20℃保存，但应╳避免反复冻融.7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣◥根过氧化物酶的（HRP）活性。操作步骤1.标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔◥中分别加标准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各ぷ取100μl分别加到第三孔和第四♀孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在╳第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀∮后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第▓七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第∩七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中ㄨ各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为1800ng/L，1200ng/L ，600ng/L，300ng/L， 150ng/L）。2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加＠ 样品及酶标试剂，其余各步↘操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔★中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量㊣不触及孔壁，轻轻晃动混匀。3.温育：用封板膜▽封板后置37℃温育30分钟。4.配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。5.洗涤：小心揭掉⊙封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。7.温育：操作同3。8.洗涤：操作同5。9.显色：每孔︻先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻←轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟. 10.终止：每〗孔加终止液50μl，终止反应（此时∑蓝色立转黄色）。11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。【猪血管生成素1(ANG-1) elisa试剂盒】注意事项：1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分△钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2．浓洗＠ 涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准●确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量●多，推荐使用排枪加样。4．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准☆品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总々稀释倍数（×n×5）。5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6．底物请避光≡保存。7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9．本试剂不同◥批号组分不得混用。10. 如与英文〓说明书有异，以英文说明书为准。试剂☆盒性能：1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.95以上。2.批内与批见应分别小于9%和11%检测范围：0.2IU/L - 6IU/L