兔出血症病毒(RHDV)酶联免疫分析试剂盒使用说←明书本试剂〖盒仅供研究使用。 使用目的：本试剂盒用于测定兔血清、血浆及相关液体样本中出血症病毒(RHDV)表达。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中兔出血症病毒(RHDV)表达。用纯∩化的兔出血症病毒(RHDV)抗体包被微孔板，制成固相抗体，可与样品中出血症病毒(RHDV)相结合，经洗涤除去未结合的抗原和其他成分后再与HRP标记的出血症病毒(RHDV)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗Ψ体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最々终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），与CUTOFF值相比较，从而判定标本中兔出血症病毒(RHDV)的存在与否。试剂盒█组成 1 30倍浓缩洗涤液 20ml×1瓶 7 终止液 6ml×1瓶2 酶标试剂 6ml×1瓶 8 阳性对照 0.5ml×1瓶3 酶标包被板 12孔×8条 9 阴性对照 0.5ml×1瓶4 样品稀释◣液 6ml×1瓶 10 说明书 1份5 显色剂A液 6ml×1瓶 11 封板膜 2张 6 显色剂B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1个标本要求 1．标本采集后尽早进行提取「，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马≡上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。操作步骤1. 编号：将样品对应微孔按序编▆号←，每板应设阴性对照2孔、阳性对照2孔、空白对照1孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各〇步操作相同）2. 加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照50μl。然后在待测样品孔先╲加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及①孔壁№，轻轻晃动混匀，3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。 4. 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5. 洗涤：小心揭掉ω　封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满╳洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 7. 温育：操作同3。8. 洗涤：操作同5。9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻◆震荡混匀，37℃避光显色15分钟.10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立♀转黄色）。11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。操作程序总结︾： 计算★和结果判定： 试验有效性：阳性对『照孔平均值≥1.00; 阴性对照平均值≤0.10 临界值（CUT OFF）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15 阴性判定：样品OD值< 临界值（CUT OFF）者为兔出血症病卐毒(RHDV)阴性 阳性判定：样品OD值≥ 临界值（CUT OFF）者为兔出血症病毒(RHDV)阳性。 注意事项1．操作严格按照说明书进々行，本试剂不同批号组分不得○混用。2．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。3．浓洗涤液可能会有结晶≡析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结〓果。4． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。5．底物请避△光保存。6．试验结果判定必须以酶标仪读数为准，使用双波ㄨ长检测时，参考波长←为630nm7．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为2M的硫酸，使用时必须注意安全。保存条件及有效期1．试剂盒保存：；2-8℃。2．有效期：6个月