上皮细胞培养

　　1)表皮细胞培养

　　1.取材：取外科植皮或手术残余皮肤小块，以角化层薄者为佳，早产流产儿皮 肤更好，切成0.5～1平方厘米小块。

　　2.EDTA处理：先置入0.02%EDTA中室温置5分钟。

　　3.冷消化：换入0.25%胰蛋白酶中，置4℃过夜。

　　4.分离：取出皮肤，用血管钳或镊子把表皮与真皮层分开。

　　5.温消化：取出表皮单独处理，用剪刀剪成更小的块后，置入新的0.25%胰蛋白酶中，37℃再消化30～60分钟。

　　6.用吸管轻轻反复吹↓打，使成细胞悬液。

　　7.培养液：通过80目不锈钢纱网滤过后，低速离心，吸上清，直接加入Eagle 液和20%小牛血清，制成细胞悬液，接种入碟々皿中，CO温箱培养。2

　　2) 乳腺组织培养

　　直接培养法：(适于培养含纤维少∞的软组织)

　　1.在含有少量培养液或Hanks液的容器中，用锋利刀片将组织反复切割成碎块。

　　2.把组织碎☉块连同液体注入离心管中，再补加少许培养液，用吸管吹打片刻， 置试管架3～5分钟。吸除上层液可排除非乳腺细胞部分。重复2～3次。

　　3.末次处理结束后，向沉降管中再补加培养液，用吸管稍吹打，使沉降物重悬。不待细胞团块下降立即通过3～4层无菌纱布滤入另管中。

　　4.调整好适宜密度，接种入培养瓶中培养。

　　胶原酶消化法：(适于处理含纤维多的较硬组织)