TaqMan探针对于大家来说不是什么新名词了，然而你知道吗，对于部分降解的RNA，如福〇尔马林固定、石蜡包埋(FFPE)样品中的RNA，TaqMan引物探针的设计有更多的讲究，你知道这是为什么吗?

　　FFPE样本在固定时导致核酸相互交联且片段化，RNA片段的大小在50-300 nt，大部分片段在100 nt左右，这些没有3端的RNA不能使用oligo-dT来逆转录，如用随机引物大量非目标RNA模板(如tRNA, rRNA)产生的cDNA又影响了目标RNA片段检测的灵敏度，因此最好是使用特异性引物。在引物探针设〓计时就需要特别考虑扩增片段不能太长，否则那些降解的RNA片段无法被检测到，导致得到的结果不准确。

　　QIAGEN 全新发布的TaqMan引物探针 - QuantiFast Probe Assays就特别考虑到了<100 nt的RNA模板，经过QIAGEN独特的设计体系, 这些降解的RNA模板也能够被检测到，这对于FFPE样品的基因表达分析非常关键。因此，相比较普通的TaqMan探针，QuantiFast Probe Assays能够更灵敏地检测到降解的↑RNA模板，分析结果更可靠。QuantiFast Probe Assays目前涵盖人、小鼠和大鼠的所有的基因，包含一对预混合的引物和一条TaqMan探针。有两种染料标记可供选择：FAM(适合所有基因)和MAX(适合特定的参考基因)。

　　另外由于FFPE样品中的核酸高度片段化且相互交→联，抽提得到的RNA中有较多的基因组DNA片段残留，这些残留的gDNA也会被扩增出来，严重影响了基因表达分析结果的真实性。

　　QIAGEN 全新发布〇的探针法检测试剂盒 -QuantiFast Probe RT-PCR Plus Kit解决了gDNA干扰的问题，这是全球首个整合了gDNA去除功能的荧光定量RT-PCR试剂盒。它包含了独特的gDNA去除缓冲液, 只需要扩增前在↙室温下经过5-10分钟的孵育即可去除gDNA，非常方便地解决了各种样品尤其是FFPE样品中gDNA残留的问题。而且，QuantiFast Probe RT-PCR Plus Kit还整合了几项QIAGEN在real-time RT-PCR试剂上的创新：

　　? 包含MP因子，使其非常⌒适合用于双重反应, 可在同管中扩增目标和内参基因，提高结果可比性，且节省成本。MP因子提高了模板周围的引物和探针浓度，并稳定了特异结合♀的引物和探针，实现多对引物探针同时高效地工作。

　　? 包含了Q-Bond分子，加快了退火和延伸的速度，节省多至50%时间。Q-Bond提高了引物和Taq酶之间的亲和性，加快退火和延伸，且不会影响灵敏度和特异性。

　　当然，此试剂秉承了QIAGEN 快速real-time RT-PCR试剂盒一贯使『用的热启动Taq酶HotStar Taq plus及K+、NH4+缓冲液体系，提高了结果的特异性和灵敏度。逆转录使用了Omniscript和Sensicript两种逆转录酶的混合，无论是高丰度或低丰度的RNA模板都能高效地逆转录。

　　将QuantiFast Probe Assays和QuantiFast Probe RT-PCR Plus Kit配合使用，再加上QIAGEN在核酸纯化领域提供①的各种优化方案，无论是遇到什么种类的样品，即便是FFPE样品，基因表达分析都可以轻松应对了。

　　RNA片段化不是问题，gDNA残留也不是问题，你是不是信☉心大增了呢?