本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定兔血清，血浆及相关液体样本中白细〖胞介素1(IL-1)的含量。
实验原理：
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中兔白细胞介素1(IL-1)水平。用纯化的兔白细胞介素1抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入白细胞介素1，再与HRP标记的羊抗兔抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅▽和样品中的IL-1呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，通过标准曲线计算样品中兔白细胞介素1(IL-1)浓度。
试剂盒组成：
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试剂盒组成 |
48孔配置 |
96孔配置 |
保存 |
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说明书 |
1份 |
1份 |
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封板膜 |
2片（48） |
2片（96） |
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密封袋 |
1个 |
1个 |
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酶标包被板 |
1×48 |
1×96 |
2-8℃保存 |
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标准品：360ng/L |
0.5ml×1瓶 |
0.5ml×1瓶 |
2-8℃保存 |
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标准品稀释液 |
1.5ml×1瓶 |
1.5ml×1瓶 |
2-8℃保存 |
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酶标试剂 |
3 ml×1瓶 |
6 ml×1瓶 |
2-8℃保存 |
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样品稀○释液 |
3 ml×1瓶 |
6 ml×1瓶 |
2-8℃保存 |
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显色剂A液 |
3 ml×1瓶 |
6 ml×1瓶 |
2-8℃保存 |
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显色剂B液 |
3 ml×1瓶 |
6 ml×1瓶 |
2-8℃保存 |
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终止液 |
3ml×1瓶 |
6ml×1瓶 |
2-8℃保存 |
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浓缩洗涤液 |
（20ml×20倍）×1瓶 |
（20ml×30倍）×1瓶 |
2-8℃保存 |
样本处理及要求：
1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集▂上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离▆心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成※份时，用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5. 组织标本：切割标▓本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍々然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4)，用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应◥尽快进行实验。若不能马Ψ 上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.
7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤
1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔№中分别加标准品100μl，然后★在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀;然后从第一孔、第二◥孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀;混匀后从第五、第六※孔中各取50μl分别加到第︼七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释〖液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为︾240 ng/L，160ng/L ，80ng/L，40ng/L，20ng/L)。
2. 加样：分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测∩样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触』及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液：将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后○备用。
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻╳震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
10. 终止：每孔︾加终止液50μl，终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
注意事项：
1. 试剂盒⊙从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未「用完，板条应装入密封袋中保存。
2. 浓洗→涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤◤时不影响结果。
3. 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4. 请每次测定的同时做标∏准曲线，最好做复▆孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值)，请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。
5. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污【染。
6. 底物请避光保存。
7. 严格按照说明╲书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8. 所有样品，洗涤液和各种废弃↙物都应按传染物处理。
9. 本试剂不同批号组分不ㄨ得混用。
10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，
在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD
值由标准曲线∑查出相应的浓度;再乘以稀释
倍数;或用标准№物的浓度与OD值计算出标
准曲线的直线「回归方程式，将样品的OD值
代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释
倍数，即为样品的实际浓度。
(此图仅供参考)
试◆剂盒性能：
1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.92以上。
2.批内㊣ 与批间应分别小于9%和15%
检测范围：
15ng/L -300ng/L
保存条件→及有效期：
1.试剂盒保存：;2-8℃。
2.有效期：6个月
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