一、层析技术的原理

　　层析法是利用不☆同物质理化性质的差异而建立起来的技术。所有的层析系统都由两个相组成：一是固定相，另一是流动相。当待◆分离的混合物随流动相通过固定相时。

　　由于各组分的理化性质存在差异，与两相发生相互作用(吸附、溶解、结合等)的能力不同，在两相中的分配(含量比)不同，且随流动相向前移动，各组分不断地在两相中进行再分配。分部收集流出液，可得到样品中所含的各单∑一组分，从而达到将各组分分离的目的。

　　二、层析法分类

　　而按层析原理还可将层析分为：

　　1. 凝胶层析：又称分子筛过滤或排阻层析等。医|学☉教育网搜集整理固定相是多孔凝胶，各组分的分子大小不同→，因而在凝胶上受阻滞的程度也不同。

　　本法的优点是所用凝胶属于惰性载体，吸附力弱，操作条件温和，不需要有机◥溶剂，对高分子物质有很好的分离效果。常用的凝胶有Sephadex G系列。凝胶层析可用※于脱盐、分离提纯、测定高分子物质的分子量、高分子溶液的↘浓缩等。

　　2. 离子交换层析：采用具有离子交换性能的物质作固定相，利用它与流动相中的离▓子能进行可逆交换的性↙质来分离离子型化合物的方法。主要用于分离氨基酸、多肽及蛋白质，也可用于分离核酸、核苷酸及其》他带电荷的生物分子。

　　3. 高效液相层析(HPLC)：在经典液相层析法基础上，引进气相层析的理论而发展起来的一项新颖」快速的分离技术。

　　具有分离能力强、测定灵敏度高◢、可在室温下进行、应用范★围广等优点，对分离蛋白质㊣　、核酸、氨基酸、生物碱、类固醇和类脂等尤其有利，根据流动相和固定相相对极性，高效液相色谱分析可分为正相和反相两种。

　　4. 亲和层析：利用待分离物质和它的特异性配ζ体间具有特异的亲和力，医|学教育网搜集整理从而达到分离的目的。将可亲和的一对分子中的一方以共价键形式与不溶性载体相连作ω为固定相吸附剂，当含混合组分的样品♂通过此固定相时，只有和固定相分子有特异亲和力的物质，才能被固定相吸附结ζ　合，性无关组分随①流动相流出。

　　改变流动相组分，可将结合的亲和物洗脱下来。亲和层析中所用的载体称为基质，与基质共价连接的化合物称配基。

　　具有专一亲和力的』生物分子对主要有：抗原与抗体，DNA与互补DNA或RNA，酶与底物、激素与受体、维生素与特异◆结合蛋白、糖蛋白与植物凝集素等。亲和层↙析可用于纯化生物大分子、稀释液的浓缩、不稳定蛋白质的贮藏、分离核︽酸等。