1.标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10 孔，在第一、第二孔中分别加标准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀;然后从第一孔、第二孔中各取100μl 分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl 弃掉，再各取50μl 分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl 分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混◣匀后从第七、第八孔中分别取50μl 加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl 弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为60ng/ml，40 ng/ml，20 ng/ml，10 ng/ml，5 ng/ml)。
2.加样：分别设空∴白孔(空白对照孔不◢加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及√孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。
4.配液：将30(48T 的20 倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T 的20 倍)倍稀释后备用。
5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加※满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此重复5 次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15 分钟.
10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应(此时蓝色立∏转黄色)。
11.测定：以空白空调零，450nm 波长依序■测量各孔的吸光度(OD 值)。测定应在加终止液后15 分钟以内进行。
