高效液相色谱仪的系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。储液器中的流动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱(固定相)内,由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同∏的分配系数,在两相中作相对运动时,经过反复多次的吸附-解吸的分配过程,各组分在移动速度上产生较大的差别,被分离成单个组分依次从柱内流出,通过检测器时,样品浓度被转换成电信号传送到记录仪,数据以图谱形式打印出来。
高效液相色谱(highperformanceliquidchromatography,HPLC)也』叫高压液相色谱(highpressureliquidchromatography)、高速液相色△谱(highspeedliquidchromatography)、高分离度液相色谱(highresolutionliquidchromatography)等。是在经典液相色谱法的基础上，于60年代后期引入了▲气相色谱理论而迅速发展起来的。它与经典液相◎色谱法的区别是填料颗粒小而均匀，小颗粒具有高▂柱效，但会引起高阻力，需用高压输送流动相，故︽又称高压液相色谱。又因分析速度快而称为高↑速液相色谱。
高【效液相色谱是目前应用最多的色谱分析方↓法，高效液相色谱系统由流动相储液体瓶、输液泵、进样器、色谱柱、检测器和记录器组成，其整体组成∩类似于气相色谱，但是针对其流动相为液体的特点作出很∩多调整。HPLC的输液泵要求输液量恒定平稳;进¤样系统要求进样便利切换严密;由于液体流动相粘度远々远高于气体，为了减低柱压高效液相色谱的色谱柱一般比较粗◤，长度也远小于气相色谱柱。HPLC应用非常广泛，几乎遍及定量定性分析的各个领域。
使用高效液相色谱时，液体待检测物被注入色谱柱，通过压力☆在固定相中移动，由于被测物种不同物质与固定相的相互作用▆不同，不同的物质顺序离开色谱柱，通过检测器得到不同的峰信号，最后通过分析比对这些信号来判断◣待侧物所含有的物质。高效液相色谱作为一种重要的分析◣方法，广泛的应用于化学和生化分析中。高效液相色谱①从原理上与经典的液相色谱没有本质的差别，它的特点是采用了高压输液泵、高灵敏度检测器和高效ㄨ微粒固定相，适于分析高沸点不易挥发、分子量大、不同极性的有︻机化合物。
发展历史：
1960年代，由于气相色谱对高沸点有机物分析的局限性，为了分离蛋白质、核酸等不易气化的大分子物质，气相色谱的理论和方法被重新引↘入经典液相色谱。1960年代末科克兰(Kirkland)、哈伯、荷瓦斯(Horvath)、莆黑斯、里普斯克等人开发了世界上第一台高效液相色谱仪，开启了高效液相〇色谱的时代。高效液相色谱使用粒径更细的固定相填充色√谱柱，提高色谱柱的塔板数，以高压驱动流动相，使得经典液相色谱需要数日乃至数※月完成的分离工作得以在几个小时甚至几●十分钟内完成。
1971年科克兰等人出版∑ 了《液相色谱的现代实践》一书，标志着●高效液相色谱法(HPLC)正式建立。在此后的时间里，高效液相色谱成为最为常用的︾分离和检测手段，在有机化学、生物化学、医学、药物开发与检¤测、化工、食品科学、环境监测、商检和法检等方面都有广泛的应用。高效液相色谱同时还极大的刺激了固定相材料＠、检测技术、数据处理技术以及卐色谱理论的发展。
1960年代前，使用ξ的填充粒大于100μm，提高柱效面临着困境，后来的研究人员便采用微粒固定相来突破着一々瓶颈。科克兰、荷瓦斯制备成功薄壳型固定相，这种在固定相在玻璃微球表面具有多孔薄壳，实现了高速传♀质，为高效液相色谱技术的发展奠定了稳固的基♀础。随着填料粒径的降低，更高的◤柱效也得以实现。1960年代研制出气动放大泵、注射泵及低流量往复式柱塞泵，但后者的脉◥冲信号很大，难以满足高效液相色谱的要求。1970年代，往复式双柱塞恒流泵，解决了这♀一问题。1970年代后科克兰制备出全多孔球形硅胶，平均⊙粒径只有7μm，具有极好的柱效，并逐渐取代了无定形微粒硅胶。之后又制造出的键合固定相使柱的稳定性大为提高，多次使用成为可能。1970年后，适合分离生物大≡分子的填料又成为研究的热点。1980年后，改善分离的选择↘性成为色谱工作者的主要问题，人们越来越认识到改变流动相①的组成事提高选择性的关键。
高效液相色谱的特点：
高压——压力可达150～300kg/cm2。色谱㊣柱每米降压为75kg/cm2以上。
高速——流速为0.1～10.0mL/min。
高效——塔板数可达5000/米。在一根柱中同时分离成份可达100种。
高灵敏度——紫外检测器灵敏度可达0.01ng。同时消耗样品少。
HPLC与经典》液相色谱相比有以下优点：
速度快——通常分析一个样品在15～30min，有些样品甚至在5min内即可完成。
分辨率高——可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果。
灵敏度高——紫外检测器可№达0.01ng，荧光和电化学检测器可达0.1pg。
色谱柱可反复使用——用一根色谱柱可分离不同的化合物。
样品量少，容易回收——样品经过色谱↓柱后不被破坏，可以收▅集单一组分或做制备。
